本發(fā)明涉及一種果蠅抗菌肽伏蠅素Diptericin的制備方法。該方法的具體步驟為：果蠅伏蠅素Diptericin基因的獲得，重組質(zhì)粒pGEX-4T-1-diptericin的構(gòu)建以及融合蛋白的表達(dá)純化和伏蠅素Diptericin的獲得。本發(fā)明方法采用基因工程方法生產(chǎn)果蠅伏蠅素Diptericin，比化學(xué)合成法成本低。以大腸桿菌為表達(dá)宿主，表達(dá)量較高，達(dá)到了315.4mg/L。以pGEX-4T-1為表達(dá)載體，易于融合蛋白的純化，只需經(jīng)一次親和層析便可得到純度較高的融合蛋白。只需經(jīng)一次酶切便可得到純的伏蠅素Diptericin，純化簡(jiǎn)便。

1.一種果蠅抗菌肽伏蠅素的制備方法，其特征在于該方法的具體步驟為：a.獲得果蠅伏蠅素Diptericin基因：提取果蠅總RNA，然后以果蠅總RNA為模板，根據(jù)果蠅diptericin基因序列設(shè)計(jì)特異性引物：上游引物D1：5′-CCGGAATTCGACGACATGACCATGAAGCC-3’；下游引物D2：5′-CCGCTCGAGCTATTAGAAATTCGGAAATC-3’；然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到280bp的diptericin片段；b.重組質(zhì)粒pGEX-4T-1-diptericin的構(gòu)建：將用EcoR?I和Xho?I雙酶切后的diptericin片斷插入質(zhì)粒pGEX-4T-1的EcoR?I/Xho?I之間，構(gòu)成重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-1-diptericin；轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，挑選出抗Ampicillin的陽(yáng)性克隆；抽提質(zhì)粒，用EcoR?I和Xho?I雙酶切，得到280bp左右的片段，即為重組質(zhì)粒pGEX-4T-1-diptericin；c.融合蛋白的表達(dá)純化和伏蠅素Diptericin的獲得：將步驟b中挑選的成功轉(zhuǎn)化有重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-1-diptericin的大腸桿菌BL21Ampicillin的陽(yáng)性克隆株在含100μg/mlAmpicillin的2×YT液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至OD600值達(dá)到0.6，加入100mMIPTG儲(chǔ)液至終濃度為1.0mM；繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)后離心，收集菌體，用緩沖液重懸菌體，超聲破菌后，離心收集上清，進(jìn)行親和層析，收集果蠅伏蠅素Diptericin的融合蛋白組分，用凝血酶酶切融合蛋白，4℃下反應(yīng)16小時(shí)，終止反應(yīng)，再次進(jìn)行親和層析，收集流出組分，冷凍干燥，得到果蠅抗菌肽伏蠅素Diptericin。