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一種真菌硫氧還蛋白的多肽、編碼序列及制備方法和應(yīng)用

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2022-01-19
  • 技術(shù)成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN200910060873.0 
  • 技術(shù)(專利)名稱 一種真菌硫氧還蛋白的多肽、編碼序列及制備方法和應(yīng)用 
  • 項目單位 武漢大學(xué)
  • 發(fā)明人 孫慧,梁一,陳義杰,劉洪洪,欒榮,車濤,姜帥 
  • 行業(yè)類別 藥品-生物藥品
  • 技術(shù)成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 朱紫渲
  • 發(fā)布時間 2022-01-19  
  • 01

    項目簡介

    本發(fā)明公開了一種真菌硫氧還蛋白的多肽、編碼序列及制備方法和應(yīng)用。該分離多肽的編碼序列為SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列和SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列,其步驟是,首先是提取楊樹菇的總RNA為模板,通過RT-PCR得到cDNA第一鏈為模板,通過PCR擴(kuò)增,得到PCR產(chǎn)物;其次是酶切得到PCR產(chǎn)物和原核表達(dá)載體,構(gòu)建重組表達(dá)載體;第三是將得到的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌宿主細(xì)胞,得到表達(dá)楊樹菇硫氧還蛋白的重組細(xì)胞;第四是將得到的重組細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)過夜獲得飽和培養(yǎng)物;等五是利用Ni親和層析法純化蛋白,分離,純化在重組細(xì)胞中表達(dá)的多肽。多肽作為制備治療或預(yù)防腫瘤疾病藥中的應(yīng)用。涉及的蛋白質(zhì)具有抗腫瘤活性。在開發(fā)抗腫瘤藥物方面有很大的應(yīng)用價值。
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  • 02

    說明書

    1.一種分離的編碼真菌硫氧還蛋白的核苷酸,其序列為SEQ?ID?NO.1所示核苷酸序列。2.一種分離的多肽,其序列為SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列。3.權(quán)利要求2所述的一種真菌硫氧還蛋白的多肽制備方法,它包括下列步驟:A、提取楊樹菇的總RNA或mRNA為模板,通過RT-PCR得到cDNA第一鏈,以此鏈為PCR模板,擴(kuò)增得到序列為SEQ?ID?NO.1所示的全長序列;B.酶切步驟A得到的序列和原核表達(dá)載體,構(gòu)建重組表達(dá)載體;C、將步驟B中得到的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌宿主細(xì)胞,形成表達(dá)楊樹菇硫氧還蛋白的重組細(xì)胞;D、將步驟C中得到的重組細(xì)胞在37℃培養(yǎng)過夜獲得飽和培養(yǎng)物,將50μL飽和培養(yǎng)物接種于5mL含氨芐青霉素100μg/mL的培養(yǎng)基中,于37℃培養(yǎng)2小時,取1mL培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至微量離心管中,加異丙基硫代半乳糖苷IPTG至終濃度為1mmol/L,對培養(yǎng)物進(jìn)行誘導(dǎo),誘導(dǎo)10小時;E、利用Ni2+親和層析法純化蛋白,分離,純化步驟D中在重組細(xì)胞中表達(dá)的多肽。4.權(quán)利要求2所述的一種分離的多肽在制備治療或預(yù)防宮頸癌藥物中的應(yīng)用。5.權(quán)利要求2所述的一種分離的多肽在制備治療或預(yù)防胃癌藥物中的應(yīng)用。6.權(quán)利要求2所述的一種分離的多肽在制備治療或預(yù)防乳腺癌藥物中的應(yīng)用。7.權(quán)利要求2所述的一種分離的多肽在制備治療或預(yù)防直腸癌藥物中的應(yīng)用。8.權(quán)利要求2所述的一種分離的多肽在制備治療或預(yù)防前列腺癌藥物中的應(yīng)用。9.權(quán)利要求2所述的一種分離的多肽在制備治療或預(yù)防肝癌藥物中的應(yīng)用。
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專利技術(shù)附圖

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