本發明公開了一種蛇孢菌素類二倍半萜化合物及其制備方法與應用。本發明所提供的化合物的結構式如式I所示，其中，R2為-CH=CH-R3、含氧雜環基或烷基取代的含氧雜環基；所述R3為烴基或含氧雜環基或烷基取代的含氧雜環基；C3與C4之間形成碳碳單鍵或碳碳雙鍵，當C3與C4之間形成碳碳雙鍵時，R1不存在；當C3與C4之間形成碳碳單鍵時，R1為羥基。上述化合物是分離得到地衣內生真菌Ulocladium?sp.經過液體發酵，對發酵產物進行分離純化得到的。經實驗證實，該類化合物可作為細胞增殖抑制劑或抗腫瘤劑。