本發明公開了一種高度純化激肽釋放酶的方法。本發明的技術方案是以豬胰為原料提取、沉淀豬胰制成丙酮粉后，靈活運用醋酸提取、丙酮沉淀，乙醚脫脂脫水，氯化鈉-氨水、丙酮協同除雜，離子交換樹脂DEAE-瓊脂糖快膠分步洗脫等傳統與現代相結合的蛋白純化技術，高度純化激肽釋放酶。本發明具有生產周期短，對化學和熱穩定性好、成本低的特點，非常適用于規模化大生產。

1.一種高度純化激肽釋放酶的方法，其特征在于，該方法包括如下
步驟：
(1)醋酸提取：將豬胰臟10Kg制成丙酮粉后，加入30倍量的
醋酸溶液，攪拌提取，離心，得上清液29.8L；
(2)丙酮沉淀：收集上清液，加入丙酮沉淀；沉淀用丙酮、乙
醚脫脂、脫水，干燥，得激肽釋放酶粗品93g；
(3)氯化鈉-氨水、丙酮協同除雜：將粗品用50倍量氯化鈉溶
液溶解，用氨水調pH，攪拌混合，過濾，得濾液；加入丙酮沉淀；
沉淀用丙酮、乙醚洗滌，干燥，得激肽釋放酶中間品60g；
(4)離子交換層析：將激肽釋放酶中間品溶于20倍量的pH4.5
的0.001mol/L醋酸緩沖液中，離心，得上清液；取上清液，按1∶10
的體積比上DEAE-瓊脂糖快膠柱吸附，吸附平衡后，用含0.2mol/L氯
化鈉的0.01mol/L醋酸緩沖液洗脫至基線，再用含0.35mol/L氯化鈉
的0.01mol/L醋酸緩沖液洗脫，收集洗脫液；將洗脫液透析脫鹽，凍
干，得激肽釋放酶精品42g。