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一種脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白及其編碼基因和用途

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-10-08
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201810142310.5 
  • 技術(專利)名稱 一種脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白及其編碼基因和用途 
  • 項目單位 中國海洋大學
  • 發明人 池姍,劉濤,劉翠 
  • 行業類別 健康用品-健康智能設備
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 李佳文
  • 發布時間 2021-10-08  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白及其編碼基因和用途,所述脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白包括蛋白GchPGM1和蛋白GchPGM2,所述蛋白GchPGM的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示,所述GchPGM2的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.4所示。本發明所述的脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白GchPGM1的編碼基因GchPGM1,其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示。本發明有助于進一步深入了解和掌握海藻糖代謝途徑、功能以及其在系統發育、環境適應等方面的作用;并以該基因為標記,篩選或選育海藻糖含量高的海藻,或過表達所述的基因,構建海藻糖含量高的基因工程海藻。
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  • 02

    說明書

    1.一種脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白,其特征在于:所述脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白為蛋白GchPGM2,所述GchPGM2的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.4所示。2.權利要求1所述的脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白GchPGM2的編碼基因GchPGM2,其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示。3.權利要求1所述的脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白的制備方法,其特征在于包括如下步驟:(1)通過同源擴增的方法獲得序列表SEQ ID NO.3所示的基因;(2)構建能高效表達和純化脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白的表達載體;(3)根據引物設計時連入的酶切位點同時進行雙酶切反應,連接獲得含有目的片段的表達質粒;用所述表達載體轉化宿主菌構建基因工程菌;(4)利用所述工程菌表達純化出目的蛋白;(5)將提取到的蛋白樣品進行Western雜交實驗以確認純化得到的蛋白是所需要的帶His標簽的目的蛋白;(6)采用5U磷酸葡萄糖變位酶、1U 6-磷酸葡萄糖脫氫酶GDH酶解,質檢制得脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白。4.根據權利要求3所述的脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白的制備方法,其特征在于:在步驟(1)中,脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白的編碼基因SEQ ID NO.3所示的基因的克隆:根據GenBank數據庫已公布藻類基因序列結合1KP數據庫調取序列用Primier Primer 5軟件設計帶酶切位點的特異性引物,設計引物3/引物4;引物3的5′端和引物4的3′端分別引入限制性酶切位點BamHI、NotI,是用于擴增單獨GchPGM2基因的引物。5.根據權利要求4所述的脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白的制備方法,其特征在于:在步驟(1)中,采用Touch-down的反應體系和反應程序進行目的片段擴增,反應程序為94℃預變性3分鐘,94℃變性30秒,60℃退火30秒,72℃延伸2分鐘,以后每個循環依次降低1度,直到45℃,共15個循環,94℃變性30秒,45℃退火30秒,72℃延伸2分鐘,20個循環,最后72℃延伸10分鐘。6.根據權利要求3所述的脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白的制備方法,其特征在于:在步驟(2)中,將PCR克隆獲得脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白的編碼基因GchPGM2克隆入原核表達載體pET32a;宿主菌為大腸桿菌E.coli Top 10。7.根據權利要求6所述的脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白的制備方法,其特征在于:在步驟(2)中,采用DNA重組技術,將序列表SEQ ID NO:3所示的基因插入pET32a的BamHI、NotI位點中,獲得重組表達載體GchPGM2-pET32a。8.根據權利要求6所述的脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶的蛋白的制備方法,其特征在于:在步驟(3)中,含有目的片段的表達質粒轉化到E.coil BL21DE3感受態細胞中,經過PCR檢測和測序獲得帶有目的基因的表達菌株,即為基因工程菌。9.權利要求1至8任一項所述的脆江蘺磷酸葡萄糖變位酶為標記,篩選或選育海藻糖含量高的海藻,或過表達所述的基因,構建海藻糖含量高的基因工程海藻中的應用。
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