本發(fā)明公開了一種生物酶法合成(R)?2?羥酸的方法，所述方法以重組基因工程菌經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)獲得的濕菌體為催化劑，以式(Ⅰ)所示外消旋2?羥酸為底物，以葡萄糖為輔助底物，以pH6.0～9.0緩沖液為反應(yīng)介質(zhì)構(gòu)成反應(yīng)體系，在20～50℃、150rpm條件下進行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，反應(yīng)完全后，將反應(yīng)液分離純化，獲得(R)?2?羥酸；所述重組基因工程菌為含2?羥酸脫氫酶HADH基因、羰基還原酶KAR基因和葡萄糖脫氫酶GDH基因的重組大腸桿菌；本發(fā)明一菌雙質(zhì)粒三酶共表達系統(tǒng)，創(chuàng)新的成功實現(xiàn)外消旋的2?羥酸通過一個工程菌轉(zhuǎn)化為單一構(gòu)型的(R)?2?羥酸，避免多菌體的培養(yǎng)，降低菌體總濃度，簡化反應(yīng)過程，減少了中間產(chǎn)物的提取步驟，而且還明顯提高了催化效率，更適合級聯(lián)催化體系的工業(yè)應(yīng)用。

1.一種生物酶法合成(R)-2-羥酸的方法，其特征在于所述方法以重組基因工程菌經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)獲得的濕菌體為催化劑，以式(Ⅰ)所示外消旋2-羥酸為底物，以葡萄糖為輔助底物，以pH6.0～9.0緩沖液為反應(yīng)介質(zhì)構(gòu)成反應(yīng)體系，在20～50℃、150rpm條件下進行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，反應(yīng)完全后，將反應(yīng)液分離純化，獲得(R)-2-羥酸；所述重組基因工程菌為含2-羥酸脫氫酶HADH基因、羰基還原酶KAR基因和葡萄糖脫氫酶GDH基因的重組大腸桿菌；所述2-羥酸脫氫酶HADH基因編碼氨基酸序列為SEQ ID NO.8所示；所述羰基還原酶KAR基因的核苷酸序列為SEQ ID NO.11所示，所述葡萄糖脫氫酶GDH基因的核苷酸序列為SEQ ID NO.13所示； 式(Ⅰ)中： 2.如權(quán)利要求1所述生物酶法合成(R)-2-羥酸的方法，其特征在于所述反應(yīng)體系中，催化劑的用量以濕菌體重量計為20-60g/L，底物終濃度為10-30mM，輔助底物終濃度為10-50mM。3.如權(quán)利要求1所述生物酶法合成(R)-2-羥酸的方法，其特征在于所述重組基因工程菌按如下方法制備：將2-羥酸脫氫酶HADH基因連到表達載體pET28b構(gòu)建質(zhì)粒pET28b-HADH，再將羰基還原酶KAR基因和葡萄糖脫氫酶GDH基因與表達載體pETDuet-1連接構(gòu)建質(zhì)粒pCDFDuet-KAR-GDH；然后將質(zhì)粒pET28b-HADH和質(zhì)粒pCDFDuet-KAR-GDH轉(zhuǎn)入大腸桿菌，篩選陽性克隆，獲得含2-羥酸脫氫酶HADH基因、羰基還原酶KAR基因和葡萄糖脫氫酶GDH基因的重組大腸桿菌。4.如權(quán)利要求1所述生物酶法合成(R)-2-羥酸的方法，其特征在于所述重組基因工程菌發(fā)酵培養(yǎng)方法為：將含2-羥酸脫氫酶HADH基因、羰基還原酶KAR基因和葡萄糖脫氫酶GDH基因的重組大腸桿菌接種到含50μg/mL鏈霉素和50μg/mL卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中，于37℃、150轉(zhuǎn)/分條件下振蕩培養(yǎng)8～10h，獲得種子液；將種子液按體積濃度2％接種量接入含50μg/mL鏈霉素和50μg/mL卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中，37℃、150轉(zhuǎn)/分條件下振蕩培養(yǎng)至OD₆₀₀達到0.4～0.6時，加入IPTG至終濃度0.1mM，于28℃、150轉(zhuǎn)/分條件下振蕩培養(yǎng)10～12h，將發(fā)酵液離心，取沉淀用生理鹽水洗滌兩次，離心，收集濕菌體。5.如權(quán)利要求1所述生物酶法合成(R)-2-羥酸的方法，其特征在于所述反應(yīng)溫度為35℃。6.如權(quán)利要求1所述生物酶法合成(R)-2-羥酸的方法，其特征在于所述反應(yīng)體系中，催化劑的用量以濕菌體重量計為40g/L，底物終濃度為20mM，輔助底物終濃度為30mM。