本發明公開了一種細胞色素C的純化新工藝，包括以下步驟：（1）從動物臟器或者酵母中提取得到細胞色素C的粗提液；（2）向粗提液中加入無機鹽進行鹽析，靜置離心棄去沉淀的雜蛋白，收集上清液；（3）加緩沖液調節上清液中無機鹽濃度至20%~35%，再用前沿疏水色譜法對其進行純化，即將所得溶液連續上樣于預先用20%~35%的無機鹽溶液平衡過的疏水色譜柱中，收集穿透液；（4）用20%~35%無機鹽溶液沖洗色譜柱至吸光度達到穩定，收集色譜流出液，與穿透液合并，即為純化后的細胞色素C。本發明操作簡便，分離純化效果好，效率高，成本低。

1.一種細胞色素C的純化工藝，包括以下步驟：（1）豬心中細胞色素C的提取取新鮮豬心l?kg，去脂肪結締組織，絞成肉糜，加400?mL水，用1.0?mol/L硫酸調pH至4.0，室溫攪拌2?h，用紗布壓濾除去殘渣，為了提取充分，將殘渣按上述條件重提取1?h；除去殘渣并合并兩次提取液，然后用1.0?mol/L氨水調pH至7.0，在4℃條件下靜置，最后離心，收集上清液，過濾即得到760?mL粗提溶液；（2）硫酸銨沉淀法粗純化豬心中的細胞色素C向所得的粗提液中加入固體硫酸銨，使其濃度為50%，沉降4小時后離心棄去沉淀，收集上層紅色清液；（3）前沿疏水色譜法分離純化豬心中的細胞色素C向120?mL步驟（2）中所得上清液中加入一定體積的pH?7.0的50?mmol/L?PBS緩沖液，將溶液中硫酸銨的終濃度調節至30.5%，再以pH?7.0的含50?mmol/L?PBS緩沖液的30.5%硫酸銨溶液平衡裝有PEG600固定相的規格為10?×?0.46?cm?I.D.的疏水色譜柱，并將調整過硫酸銨濃度的細胞色素C溶液在流速1.0?mL/min?下連續上樣于已平衡過的疏水色譜柱中，收集穿透液，用30.5%硫酸銨溶液沖洗色譜柱15?min以使吸光度達到穩定，并收集該過程中的色譜流出液，與上述穿透液合并，即得到純化后的細胞色素C。2.一種細胞色素C的純化工藝，包括以下步驟：（1）牛心中細胞色素C的提取取新鮮牛心l?kg，去除脂肪和韌帶等結締組織，用生理鹽水漂洗除去血污，絞成肉糜，加400?mL水，用2.0?mol/L硫酸調pH至3.4，室溫攪拌3?h，用紗布壓濾除去殘渣，為了提取充分，將殘渣按上述條件再提取1?h，除去殘渣并合并兩次提取液，然后用2.0?mol/L氨水調pH至7.5，在4℃條件下靜置，最后離心，收集上清液，過濾即得到750?mL粗提溶液；（2）硫酸銨沉淀法粗純化牛心中的細胞色素C向所得的牛心細胞色素C粗提液中加入一定量的固體硫酸銨，使其濃度為60%，沉降3小時后離心棄去沉淀，收集上層紅色清液；（3）前沿疏水色譜法分離純化豬心中的細胞色素C向180?mL步驟（2）中所得上清液中加入一定體積的pH?7.0的50?mmol/L?PBS緩沖液，將溶液中硫酸銨的終濃度調節至32%，再以pH?7.5的含50?mmol/L?Tris緩沖液的32%硫酸銨溶液平衡裝有苯基固定相的規格為10?×?0.46?cm?I.D.的疏水色譜柱，并將所得樣品溶液在流速1.0?mL/min?下連續上樣于已平衡過的疏水色譜柱中，收集穿透液，用32%硫酸銨溶液沖洗色譜柱15?min以使吸光度達到穩定，并收集該過程中的色譜流出液，與上述穿透液合并，即得到純化后的細胞色素C。