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治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液及其制備方法

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-12-21
  • 技術(shù)成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN201910366815.4 
  • 技術(shù)(專利)名稱 治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液及其制備方法 
  • 項目單位 南京鼓樓醫(yī)院
  • 發(fā)明人 丁利軍,孫海翔,徐璐,李一凡 
  • 行業(yè)類別 藥品-生物藥品
  • 技術(shù)成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 周青楊
  • 發(fā)布時間 2021-12-21  
  • 01

    項目簡介

    本發(fā)明公開了一種治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液及其制備方法,包括懸浮的臍帶動脈旁干細胞和溶劑。溶劑可以為富含血小板的臍帶血漿或含有人血清白蛋白的注射用PBS。其制備方法為臍帶動脈組織培養(yǎng)后衍生出動脈旁干細胞,酶解法消化獲得單個所述臍帶動脈旁干細胞,經(jīng)PBS洗滌兩次后,再與溶劑輕輕混勻,獲得臍帶動脈旁干細胞注射液。該細胞取自醫(yī)療廢棄物臍帶,具有易分離、增殖速度快、免疫原性低的特性。含5%人血清白蛋白的PBS或富含血小板的臍帶血漿重懸臍帶動脈旁干細胞后制備成注射懸液,懸液注射后顯著改善下肢缺血模型小鼠的血流供應(yīng)。
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  • 02

    說明書

    1.一種治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液,其特征在于:包括懸浮的臍帶動脈旁干細胞和溶劑。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液,其特征在于:其中,所述溶劑為富含血小板的臍帶血漿。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液,其特征在于:其中,所述臍帶動脈旁干細胞的含量為5×106/mL。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液,其特征在于:其中,所述溶劑為含有人血清白蛋白的注射用PBS。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液,其特征在于:其中,所述臍帶動脈旁干細胞的含量為5×106/mL;人血清白蛋白的含量為PBS體積的5%。6.如權(quán)利要求2所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液的制備方法,其特征在于:臍帶動脈組織培養(yǎng)后衍生出動脈旁干細胞,酶解法消化獲得單個所述臍帶動脈旁干細胞,經(jīng)PBS洗滌兩次后,再與所述富含血小板的臍帶血漿輕輕混勻,獲得臍帶動脈旁干細胞注射液。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液,其特征在于:其中,所述臍帶動脈旁干細胞的制備過程為:足月生產(chǎn)后取新鮮人臍帶7-15cm,4h內(nèi)用含有10%青鏈雙抗和1%肝素的PBS冰上4℃運至實驗室;在超凈工作臺內(nèi)取出臍帶,擠出臍帶中的血,PBS反復沖洗直至無血液和血塊后,剪刀修齊兩斷面,沿臍帶內(nèi)血管長軸方向剪開臍帶,用鑷子鈍性分離臍帶動脈;將臍帶動脈沿與臍帶動脈垂直方向剪碎至1-2mm3大小組織塊,組織塊均勻鋪于100mm細胞培養(yǎng)皿底,放置于5%CO2、37℃飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)3h;然后緩慢加入5ml DMEM-LG培養(yǎng)基至100mm皿中,輕放置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng);第一周第3天和第7天各加DMEM-LG培養(yǎng)基3ml、2ml,之后第二周半量換液2次,之后第三周全量換液2次,期間觀察組織塊周圍貼壁細胞爬出情況;3周后細胞長到80%融合時去除臍帶動脈組織塊,0.05%胰酶消化,傳代培養(yǎng);取P3-P5代細胞用于注射懸液制備。8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液,其特征在于:其中,所述富含血小板的臍帶血漿的制備方法為:在50mL離心管中加入750IU肝素鈉收集臍帶血40mL;在室溫下200g低速離心10-15min,收集上層液體;對所述上層液體再次2000g高速離心10min,血小板沉積離心管底部,棄去部分上清血漿,留200uL血漿及底部沉積的血小板,輕輕重懸獲得富含血小板的臍帶血漿。9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液,其特征在于:其中,獲得的臍帶動脈旁干細胞的單細胞懸液,使用不含鈣、鎂的PBS洗滌2次,然后細胞沉淀采用所述富含血小板的臍帶血漿加以重懸,輕輕混勻制成臍帶動脈旁干細胞注射液;所述臍帶動脈旁干細胞注射液放于4℃短暫儲存,12h內(nèi)使用,使用前輕輕搖勻。10.如權(quán)利要求4所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液的制備方法,其特征在于:臍帶動脈組織培養(yǎng)后衍生出動脈旁干細胞,酶解法消化獲得單個所述臍帶動脈旁干細胞,使用不含鈣、鎂的PBS洗滌兩次,然后細胞沉淀采用含有5%人血清白蛋白的PBS加以重懸,輕輕混勻制成臍帶動脈旁干細胞注射液;所述臍帶動脈旁干細胞注射液放于4℃短暫儲存,12h內(nèi)使用,使用前輕輕搖勻。
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專利技術(shù)附圖

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