本發明涉及一種內肽酶活力測定的新方法；是以牛血清白蛋白為底物，根據內肽酶特征產物肽的顯色反應，測定反應前后反應體系吸光度值，同時用能反應體系中肽含量多少的標準物繪制標準曲線，通過查標準曲線確定反應前后產物肽含量的變化，從而對內肽酶準確定量。本發明克服了常規內肽酶活力測定過程中蛋白質以及氨基酸的干擾，能快速準確測定內肽酶活力,操作簡單，快速。

1.一種內肽酶活力測定的方法，其特征在于，步驟如下：1)標準曲線的繪制以縮二脲濃度為橫坐標x，吸光度OD值為縱坐標y，繪制標準曲線方程：y=ax+b，變形得方程-1：x=（y-b）/a；方程中a，b為常數，分別代表曲線與x軸和y軸的交點，r²≥0.99；所述縮二脲濃度單位：mg/mL；2)粗酶液提取對于固體樣品，先粉碎過80目篩；參照食品安全國家標準GB5009.3-2016食品中水分的測定，計算固體樣品粉末的水分含量，記為w；取粉碎后的待測固體樣品適量，記為m，加入樣品質量4倍的pH5.2、濃度為0.1mol/L的檸檬酸－磷酸氫二鈉緩沖液，4℃條件下磁力攪拌30min，用pH5.2，濃度為0.1mol/L檸檬酸－磷酸氫二鈉緩沖液定容至V；4℃條件下過濾收集上清液作為待測粗酶液；對于液體樣品直接取樣，記為V₀ ，置于冰浴中，緩慢加入95%乙醇溶液，使體系中乙醇的終濃度為60% v/v，靜置沉淀后，抽濾，得濕酶粉；于4℃冰箱保存；測定酶活時，用濃度為0.05mol/L、pH6.0的檸檬酸―磷酸氫二鈉緩沖液復溶并定容至V，即得到待測粗酶液；3)實驗組的測定實驗組設3個平行處理；每個平行處理分別取待測粗酶液，記為v，用濃度為0.2 mol/L，pH4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液補足待測粗酶液至2mL；50℃水浴預熱10min后加入牛血清白蛋白溶液1mL進行反應，加入牛血清白蛋白溶液后在50℃水浴中的反應時間記為h；加入0.8mL濃度為15%三氯乙酸溶液終止反應；4℃靜置30min，5000r/min離心10min收集全部上清液；向上清液中添加4mL堿性硫酸銅溶液，用漩渦混合器充分搖勻，在室溫下放置30min，于540nm波長下測定吸光值；三個平行吸光度值分別記為y1，y2，y3；y1，y2，y3分別代入方程-1計算實驗組反應體系中與每個平行吸光度值對應的縮二脲的濃度x1，x2，x3；計算平均值`x1（mg/mL）=（x1+x2+x3）/3；4)對照組的測定對照組設3個平行處理；每個平行處理分別取待測粗酶液v，用濃度為0.2 mol/L，pH4.5醋酸-醋酸鈉緩沖溶液補足待測粗酶液體積至2mL；50℃水浴預熱10min后加入牛血清白蛋白溶液1mL后立即加入0.8 mL濃度為15%三氯乙酸溶液，漩渦混合器充分混勻，使蛋白質沉淀，在50℃水浴中的反應時間記為h；5000r/min離心10min收集全部上清液，上清液中添加4mL堿性硫酸銅溶液，用漩渦混合器充分搖勻，在室溫下放置30min，于540nm波長下測定吸光值，三個平行吸光度值分別記為y<sub>01</sub>，y<sub>02</sub>，y<sub>03</sub>；將對照組的三個吸光度值分別代入方程-1計算對照組反應體系中與每個平行吸光度值對應的縮二脲的濃度x<sub>01</sub>，x<sub>02</sub>，x<sub>03</sub>，計算平均值`x₀（mg/mL）=（x₀₁+x₀₂+x₀₃）/3；5)酶活力計算固體樣品內肽酶活力按照如下公式3計算； 液體樣品內肽酶活力按照如下公式4計算； 公式3）、4）中：U：內肽酶活力單位，單位：u 實驗組縮二脲濃度平均值，單位：mg/mL 對照組縮二脲濃度平均值，單位：mg/mL7：單位：mLh：酶與底物反應時間，單位：minm：固體待測樣品的取樣量，單位：gV：粗酶液提取中定容的體積，單位：mLv：反應組和對照組試管中加入粗酶液體積，單位：mLw：樣品水分含量，單位：%V₀：液體樣品取樣的毫升數，單位：mL。2.如權利要求1所述一種內肽酶活力測定的方法，其特征在于，所述步驟2）中，根據原料酶活力大小調整定容體積V，酶活力大適當增大定容體積，使實驗組與對照組540nm下的吸光度差值至少為0.1。3.如權利要求1所述一種內肽酶活力測定的方法，其特征在于，所述步驟3）中，根據原料酶活力大小調整反應時間h，酶活力大適當縮短反應時間，使實驗組與對照組540nm下的吸光度差值至少為0.1。4.如權利要求1所述一種內肽酶活力測定的方法，其特征在于，所述步驟3）中待測粗酶液體積v≤2mL。