本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種可溶性表達(dá)馬紅球菌致病基因VapA蛋白的方法，是將VapA基因克隆到PMAL?C5x載體上，構(gòu)建表達(dá)載體PMAL?VapA，并將PMAL?VapA轉(zhuǎn)化至原核表達(dá)菌，通過IPTG在20℃下誘導(dǎo)獲得；以上述方法獲得的重組蛋白幾乎全部以可溶表達(dá)的形式存在。將該重組蛋白純化后，濃度可達(dá)2mg/mL，該重組蛋白具有良好的免疫原性，更適于臨床治療用高免血清抗體和疫苗的制備、臨床診斷試劑的開發(fā)和應(yīng)用以及馬紅球菌致病機(jī)理的研究。

1.一種可溶性表達(dá)馬紅球菌致病基因VapA蛋白的方法，其特征在于，擴(kuò)增VapA基因，并
克隆到pMAL-c5x載體上，構(gòu)建表達(dá)載體pMAL-VapA，將pMAL-VapA轉(zhuǎn)化至原核表達(dá)菌，通過
IPTG在20℃下誘導(dǎo)獲得可溶性VapA蛋白；具體包括以下步驟：
S1. 重組質(zhì)粒pMAL-VapA的構(gòu)建：用SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所述引物擴(kuò)增VapA基
因，將擴(kuò)增產(chǎn)物與pZeroBack/blunt載體相連構(gòu)建質(zhì)粒pZeroBack-VapA；最后將pMAL-c5x和
測序正確的pZeroBack-VapA進(jìn)行雙酶切后構(gòu)建表達(dá)載體pMAL-VapA；
S2. 將pMAL-VapA 轉(zhuǎn)化入BL21菌中，測序鑒定為陽性之后，將菌液接種于培養(yǎng)基中，培
養(yǎng)至OD₆₀₀值為0.5～0.7后，加入IPTG誘導(dǎo)后，離心重懸菌體，破碎菌體，收集上清，獲得可溶
性VapA蛋白；
所述VapA基因的序列為GenBank JN990991.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，IPTG誘導(dǎo)的濃度為0.3～0.7mM，誘導(dǎo)時(shí)間
為8～12h。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，IPTG誘導(dǎo)的濃度為0.7mM，誘導(dǎo)時(shí)間為8h。