本發明公開了一種青枯菌噬菌體的應用方法，將青枯菌噬菌體液置于斜插在煙株莖稈的無菌注射器針頭中，然后用無菌礦物油覆蓋青枯菌噬菌體液防止蒸發和污染，使青枯菌噬菌體通過無菌注射器針頭直接進入煙株莖稈中。本發明根據青枯病是典型細菌性維管束病害的特征，設計利用噬菌體資源以防治青枯病的應用方法，該方法應用于作物青枯病的防控，可以減少青枯菌噬菌體的施用量，避免陽光、紫外線、雨水等外界因素的影響，還能避免或延緩病原青枯菌與其噬菌體因長期接觸通過的協同進化作用而獲得對噬菌體的抗性。

1.一種青枯菌噬菌體的應用方法，其特征在于：將青枯菌噬菌體液置于斜插在煙株莖
稈的無菌注射器針頭中，然后用無菌礦物油覆蓋青枯菌噬菌體液防止蒸發和污染，使青枯
菌噬菌體通過無菌注射器針頭直接進入煙株莖稈中；所述無菌礦物油的制備方法為：將
300ml礦物油倒入500ml螺口瓶，在121℃下滅菌30min，然后冷卻后保存備用；所述無菌注射
器針頭的制備方法為：用無菌水泡針頭過夜，無菌水沖洗兩次，高壓滅菌后50℃烘干，待冷
卻至室溫后，分裝好保存備用；每個煙株莖稈注射青枯菌噬菌體液50-100微升；在插入煙株
莖稈的無菌注射器針頭中，滴入無菌礦物油的量為50-100微升。
2.根據權利要求1所述的青枯菌噬菌體的應用方法，其特征在于：所述青枯菌噬菌體液
的制備方法為：采用共培養的方法擴繁青枯菌噬菌體株系，在滅菌后的500ml三角瓶中，加
入300mlCPG液體培養基和300μl含青枯菌的無菌水，在28℃下震蕩培養2-4h，吸光值OD₆₀₀在
0.2-0.3之間，再加入300μl含噬菌體的無菌水，在28℃下繼續震蕩培養2-3h；之后以8000r/
min的轉速離心培養液10min，取上清液，用0.22μm的濾膜過濾，取濾液備用，其中所述CPG液
體培養基采用以下方法制作：水解酪蛋白：1g；蛋白胨：10g；葡萄糖：5g；蒸餾水：1000ml；酸
度調節到pH7.0，在121℃下滅菌30min；冷卻至55℃，分裝到培養皿中備用。
3.根據權利要求1所述的青枯菌噬菌體的應用方法，其特征在于：煙株莖稈輸入青枯菌
噬菌體時間為：煙株移栽到培養缽或田間后的旺長時期。