本發(fā)明公開了一種棕色蘑菇三級(jí)菌種擴(kuò)繁體系的建立方法，包括母種、液體菌種、栽培種的三級(jí)菌種擴(kuò)繁。其中的母種培養(yǎng)基配方(g/L)：草炭土600g，葡萄糖20g，麥粒100g，硫酸鎂1.5g，磷酸二氫鉀1g，蛋白胨2g，水1000mL；液體菌種配方（g/L）：馬鈴薯200，葡萄糖20，蛋白胨2，磷酸二氫鉀2，硫酸鎂1，VB10.01，pH自然；栽培種的制作：麥粒土培養(yǎng)基(%)：麥粒92，石膏5，草炭土3。采用本發(fā)明的擴(kuò)繁體系較之傳統(tǒng)的固態(tài)三級(jí)菌種，擴(kuò)繁周期縮短了38天。本發(fā)明研究出的棕色蘑菇三級(jí)菌種的最佳擴(kuò)繁方案，對(duì)棕色蘑菇的大規(guī)模工廠化生產(chǎn)具有一定的指導(dǎo)意義。

1.一種棕色蘑菇三級(jí)菌種擴(kuò)繁體系的建立方法，其特征在于它包括母種、液體菌種、栽培種的三級(jí)菌種擴(kuò)繁組合在一起，建立的一種擴(kuò)繁體系，其方法如下：（1）母種的制備：1）母種培養(yǎng)基配方，即草炭土培養(yǎng)基(g/L)：草炭土600，葡萄糖20，麥粒100，硫酸鎂1.5，磷酸二氫鉀1，蛋白胨2，水1000mL；2）配制培養(yǎng)基：取適量草炭土、麥粒，加入1000ml的清水中煮沸20～30min，濾液；向?yàn)V液中加入硫酸鎂、磷酸二氫鉀、蛋白胨、葡萄糖、瓊脂，待藥品溶化后，補(bǔ)足水分，分裝試管；3）滅菌：121℃，滅菌20min，滅菌結(jié)束后，取出擺斜面；4）接種、培養(yǎng)：嚴(yán)格按照無菌操作將棕色蘑菇菌絲接種于斜面中部；25℃恒溫培養(yǎng)至滿管；5）挑雜、保存：將染菌、生長狀態(tài)不佳的斜面去除后，將剩余斜面置于4℃冰箱保存，備用；（2）液體菌種的制備：1）液體菌種配方，即種子培養(yǎng)基（g/L）：馬鈴薯200，葡萄糖?20，蛋白胨?2，磷酸二氫鉀?2，硫酸鎂?1，VB1?0.01，pH自然；麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基為（g/L）：麩皮?120，葡萄糖?15，蛋白胨?2，pH自然；2）配制種子液培養(yǎng)基：稱取馬鈴薯處理后，加水煮沸30分鐘，過濾，再加入葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、VB1，充分溶解后趁熱過濾，分裝，50mL/250mL三角瓶；3）滅菌，121℃，滅菌20min；4）制備種子液：滅菌結(jié)束后，取出放涼，嚴(yán)格按照無菌操作接種，取5塊0.5?cm²新鮮斜面菌種接種于種子培養(yǎng)基中，25℃，150rpm搖床培養(yǎng)7天；5）配制發(fā)酵培養(yǎng)基：取麩皮，加入清水煮沸20-30min，濾液，向麩皮煮液中加入葡萄糖、蛋白胨、硫酸鎂、磷酸二氫鉀，待藥品溶解后，加入清水補(bǔ)足水分，分裝，100mL/250mL三角瓶；6）滅菌：121℃，滅菌20min；7）接種、培養(yǎng)：將制備好的種子液以接種量?8%移入裝發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，25℃，150rpm培養(yǎng)7天，即得棕色蘑菇液體菌種；8）挑雜：每日通過外觀觀察發(fā)酵液是否渾濁，有酸味，則說明被細(xì)菌污染，除去；（3）栽培種的制作：1）麥粒土培養(yǎng)基(%)：麥粒92，石膏5，草炭土3；2）煮麥：選擇無蟲蛀的小麥，倒入沸水中煮20～25分鐘，并不斷攪拌，煮至麥粒無白心時(shí)，立即停火將麥粒撈出，晾至表面無水跡；3）配料：將石膏、草炭土按比例加入，并將其翻拌均勻，即可裝瓶；　　4）裝瓶滅菌：121℃，滅菌2～2.5小時(shí)；5）接種：將所制備的液體菌種，以15%的接種量均勻噴入栽培種中，嚴(yán)格按照無菌操作要求操作；6）培養(yǎng)：將接種后的栽培種置于25℃恒溫培養(yǎng)室中遮光培養(yǎng)，至滿瓶；7）挑雜：將染菌、生長狀態(tài)不佳的栽培種去除后，將剩余菌種保存?zhèn)溆谩?