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食品紅10檢測試劑盒及其制備方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-10-01
  • 技術成熟度:正在研發
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201210281763.9 
  • 技術(專利)名稱 食品紅10檢測試劑盒及其制備方法 
  • 項目單位 廣州市質量監督檢測研究院
  • 發明人 郭新東,羅海英,冼燕萍,蔡瑋紅,吳玉鑾,柯振華,陳意光,羅東輝 
  • 行業類別 醫藥制造-制藥設備
  • 技術成熟度 正在研發
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 王卿
  • 發布時間 2021-10-01  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種食品紅10檢測試劑盒,屬于添加劑檢測技術領域。該試劑盒包括每個微孔內包被濃度為1-3μg/mL食品紅10特異性抗原的酶標板,濃度為1-3μg/mL的食品紅10特異性抗體,且所述食品紅10特異性抗原與食品紅10特異性抗體溶液的用量比為1:1。本發明還公開了一種食品紅10檢測試劑盒制備方法。本發明的試劑盒在檢測食品紅10時可一次連續檢測多個樣品,具有便捷,快速,靈敏、成本低的特點。適合用于快速而準確得檢測大批量樣品中的食品紅10。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種食品紅10檢測試劑盒,其特征在于,主要包括:
    1)包被食品紅10特異性抗原的酶標板:所述酶標板的每個微孔內食品紅
    10特異性抗原的濃度為1-3μg/mL;
    2)食品紅10特異性抗體溶液:該食品紅10特異性抗體的濃度為1-3μg/mL;
    所述食品紅10特異性抗原與食品紅10特異性抗體溶液的用量比為1:1;
    所述包被食品紅10特異性抗原的酶標板通過以下方法制備:將食品紅10
    和三乙胺分散于干燥二氯甲烷中,零攝氏度下加入甲磺酰氯作為活化試劑,室
    溫攪拌,食品紅10的醇羥基可轉化成甲磺酯基;隨后將甲磺酯化食品紅10加
    入無水乙醇中,加入液氨,回流攪拌h,制得能夠與蛋白質偶聯的食品紅10的
    半抗原;再將其與N-羥基丁二酰胺和碳二亞胺混合,再與牛血清白蛋白混合,
    室溫攪拌,偶聯制備得到食品紅10特異性抗原;將食品紅10特異性抗原包被
    于酶標板中,即得;
    所述食品紅10特異性抗體通過以下方法制備:以上述合成的食品紅10特
    異性抗原作為免疫原對小鼠進行免疫;免疫后,取血清效價高的小鼠,取其脾
    細胞與骨髓瘤細胞SP2/0進行細胞融合;采用有限稀釋法篩選雜交瘤細胞,得
    到完全同質的單克隆抗體和穩定的單克隆雜交瘤細胞株;并取不完全佐劑腹腔
    注射進行致敏后的小鼠,將雜交瘤細胞混懸液注射到小鼠腹腔中,收集腹水,
    經辛酸-硫酸銨沉淀法進行腹水純化,得到純化的食品紅10單克隆抗體。
    2.根據權利要求1所述的食品紅10檢測試劑盒,其特征在于,還包括有
    酶標二抗,所述酶標二抗是濃度按1:10000比例稀釋的辣根過氧化物酶標記羊
    抗鼠二抗。
    3.根據權利要求1或2所述的食品紅10檢測試劑盒,其特征在于,所述
    食品紅10特異性抗原的濃度為2μg/mL;所述食品紅10特異性抗體的濃度為2
    μg/mL。
    4.根據權利要求1所述的食品紅10檢測試劑盒,其特征在于,還包括食
    品紅10標準品溶液、底物顯色劑、洗滌液、終止液、封閉液和濃縮樣品稀釋液。
    5.根據權利要求4所述的食品紅10檢測試劑盒,其特征在于,所述食品
    紅10特異性抗體是鼠源單克隆抗體;所述食品紅10特異性抗原為食品紅10與
    載體蛋白的偶聯物;所述載體蛋白為牛血清白蛋白;所述食品紅10標準品溶液
    濃度分別為1×105μg/L、1×104μg/L、1×103μg/L、1×102μg/L、1×101μg/L、1×100
    μg/L;所述顯色劑由顯色劑A和顯色劑B組成,所述顯色劑A為過氧化氫或過
    氧化脲,所述顯色劑B為鄰苯二胺或四甲基聯苯胺;所述終止液為1-2mol/L的
    硫酸溶液;所述洗滌液為含有0.05%-0.5%吐溫-20的0.01M,pH7.4的磷酸鹽緩
    沖液;所述封閉液為含5%脫脂奶粉的0.01M,pH7.4的磷酸鹽緩沖液;所述濃縮
    樣品稀釋液為0.01M,pH7.4的磷酸鹽緩沖液;所述酶標板的材料為聚苯乙烯、
    聚乙烯、聚丙烯中的一種。
    6.一種食品紅10檢測試劑盒制備方法,其特征在于,主要包括以下步驟:
    1)制備包被食品紅10特異性抗原的酶標板:將食品紅10和三乙胺分散于
    干燥二氯甲烷中,零攝氏度下加入甲磺酰氯作為活化試劑,室溫攪拌,食品紅
    10的醇羥基可轉化成甲磺酯基;隨后將甲磺酯化食品紅10加入無水乙醇中,加
    入液氨,回流攪拌h,制得能夠與蛋白質偶聯的食品紅10的半抗原;再將其與
    N-羥基丁二酰胺和碳二亞胺混合,再與牛血清白蛋白混合,室溫攪拌,偶聯制
    備得到食品紅10特異性抗原;將食品紅10特異性抗原包被于酶標板中,所述
    酶標板的每個微孔內食品紅10特異性抗原的濃度為1-3μg/mL;
    2)制備食品紅10特異性抗體:以步驟1)中合成的食品紅10特異性抗原
    作為免疫原對小鼠進行免疫;免疫后,取血清效價高的小鼠,取其脾細胞與骨
    髓瘤細胞SP2/0進行細胞融合;采用有限稀釋法篩選雜交瘤細胞,得到完全同
    質的單克隆抗體和穩定的單克隆雜交瘤細胞株;并取不完全佐劑腹腔注射進行
    致敏后的小鼠,將雜交瘤細胞混懸液注射到小鼠腹腔中,收集腹水,經辛酸-硫
    酸銨沉淀法進行腹水純化,得到純化的食品紅10單克隆抗體;所述食品紅10
    特異性抗體的濃度為1-3μg/mL。
    7.根據權利要求6所述的食品紅10檢測試劑盒制備方法,其特征在于,
    步驟1)中,制備食品紅10特異性抗原的具體方法為:將0.87g食品紅10和
    1.01g三乙胺分散于100mL干燥二氯甲烷中,零攝氏度下加入0.5mL甲磺酰氯作
    為活化試劑,室溫攪拌3.5h,食品紅10的醇羥基可轉化成甲磺酯基;隨后將
    甲磺酯化食品紅10加入無水乙醇中,加入20倍量的液氨,回流攪拌5h,制得
    能夠與蛋白質偶聯的食品紅10的半抗原;再將其與N-羥基丁二酰胺和碳二亞胺
    混合,再與牛血清白蛋白混合,室溫攪拌1h,偶聯制備得到食品紅10特異性抗
    原。
    8.根據權利要求6所述的食品紅10檢測試劑盒制備方法,其特征在于,
    步驟2)為:以步驟1)中合成的食品紅10特異性抗原作為免疫原對10周齡的
    Balb/c小鼠進行免疫;首次免疫使用完全弗氏佐劑與食品紅10特異性抗原溶液
    乳化,抗原濃度為0.4mg/mL,劑量為120μg/只,以后每次加強免疫使用不完
    全弗氏佐劑與食品紅10特異性抗原溶液乳化,劑量同初次免疫;初次免疫兩周
    后,每間隔10天加強免疫一次,共免疫5-10次,當抗體效價不再升高時,進
    行最后一次免疫,最后一次不加免疫佐劑直接用食品紅10特異性抗原水溶液腹
    腔注射,劑量同初次免疫;尾部取血檢測血清效價;取血清效價高的小鼠,在
    無菌條件下,取其脾細胞按6:1比例與骨髓瘤細胞SP2/0進行細胞融合;采用
    有限稀釋法篩選雜交瘤細胞,得到完全同質的單克隆抗體和穩定的單克隆雜交
    瘤細胞株;并取Balb/c小鼠,于一周前采用不完全佐劑腹腔注射進行致敏,劑
    量為0.5mL/只;將細胞濃度為1.5萬/mL的雜交瘤細胞混懸液注射到小鼠腹腔
    中,劑量為0.5mL/只;接種雜交瘤細胞7~10天后,收集腹水,反復收集數次;
    存于4℃冰箱保存;經辛酸-硫酸銨沉淀法進行腹水純化,得到純化的食品紅10
    單克隆抗體。
    展開

專利技術附圖

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