本發明公開了一種食品紅10檢測試劑盒，屬于添加劑檢測技術領域。該試劑盒包括每個微孔內包被濃度為1-3μg/mL食品紅10特異性抗原的酶標板，濃度為1-3μg/mL的食品紅10特異性抗體，且所述食品紅10特異性抗原與食品紅10特異性抗體溶液的用量比為1：1。本發明還公開了一種食品紅10檢測試劑盒制備方法。本發明的試劑盒在檢測食品紅10時可一次連續檢測多個樣品，具有便捷，快速，靈敏、成本低的特點。適合用于快速而準確得檢測大批量樣品中的食品紅10。

1.一種食品紅10檢測試劑盒，其特征在于，主要包括：
1)包被食品紅10特異性抗原的酶標板：所述酶標板的每個微孔內食品紅
10特異性抗原的濃度為1-3μg/mL；
2)食品紅10特異性抗體溶液：該食品紅10特異性抗體的濃度為1-3μg/mL；
所述食品紅10特異性抗原與食品紅10特異性抗體溶液的用量比為1：1；
所述包被食品紅10特異性抗原的酶標板通過以下方法制備：將食品紅10
和三乙胺分散于干燥二氯甲烷中，零攝氏度下加入甲磺酰氯作為活化試劑，室
溫攪拌，食品紅10的醇羥基可轉化成甲磺酯基；隨后將甲磺酯化食品紅10加
入無水乙醇中，加入液氨，回流攪拌h，制得能夠與蛋白質偶聯的食品紅10的
半抗原；再將其與N-羥基丁二酰胺和碳二亞胺混合，再與牛血清白蛋白混合，
室溫攪拌，偶聯制備得到食品紅10特異性抗原；將食品紅10特異性抗原包被
于酶標板中，即得；
所述食品紅10特異性抗體通過以下方法制備：以上述合成的食品紅10特
異性抗原作為免疫原對小鼠進行免疫；免疫后，取血清效價高的小鼠，取其脾
細胞與骨髓瘤細胞SP2/0進行細胞融合；采用有限稀釋法篩選雜交瘤細胞，得
到完全同質的單克隆抗體和穩定的單克隆雜交瘤細胞株；并取不完全佐劑腹腔
注射進行致敏后的小鼠，將雜交瘤細胞混懸液注射到小鼠腹腔中，收集腹水，
經辛酸-硫酸銨沉淀法進行腹水純化，得到純化的食品紅10單克隆抗體。
2.根據權利要求1所述的食品紅10檢測試劑盒，其特征在于，還包括有
酶標二抗，所述酶標二抗是濃度按1:10000比例稀釋的辣根過氧化物酶標記羊
抗鼠二抗。
3.根據權利要求1或2所述的食品紅10檢測試劑盒，其特征在于，所述
食品紅10特異性抗原的濃度為2μg/mL；所述食品紅10特異性抗體的濃度為2
μg/mL。
4.根據權利要求1所述的食品紅10檢測試劑盒，其特征在于，還包括食
品紅10標準品溶液、底物顯色劑、洗滌液、終止液、封閉液和濃縮樣品稀釋液。
5.根據權利要求4所述的食品紅10檢測試劑盒，其特征在于，所述食品
紅10特異性抗體是鼠源單克隆抗體；所述食品紅10特異性抗原為食品紅10與
載體蛋白的偶聯物；所述載體蛋白為牛血清白蛋白；所述食品紅10標準品溶液
濃度分別為1×10⁵μg/L、1×10⁴μg/L、1×10³μg/L、1×10²μg/L、1×10¹μg/L、1×10⁰
μg/L；所述顯色劑由顯色劑A和顯色劑B組成，所述顯色劑A為過氧化氫或過
氧化脲，所述顯色劑B為鄰苯二胺或四甲基聯苯胺；所述終止液為1-2mol/L的
硫酸溶液；所述洗滌液為含有0.05％-0.5％吐溫-20的0.01M，pH7.4的磷酸鹽緩
沖液；所述封閉液為含5％脫脂奶粉的0.01M，pH7.4的磷酸鹽緩沖液；所述濃縮
樣品稀釋液為0.01M，pH7.4的磷酸鹽緩沖液；所述酶標板的材料為聚苯乙烯、
聚乙烯、聚丙烯中的一種。
6.一種食品紅10檢測試劑盒制備方法，其特征在于，主要包括以下步驟：
1)制備包被食品紅10特異性抗原的酶標板：將食品紅10和三乙胺分散于
干燥二氯甲烷中，零攝氏度下加入甲磺酰氯作為活化試劑，室溫攪拌，食品紅
10的醇羥基可轉化成甲磺酯基；隨后將甲磺酯化食品紅10加入無水乙醇中，加
入液氨，回流攪拌h，制得能夠與蛋白質偶聯的食品紅10的半抗原；再將其與
N-羥基丁二酰胺和碳二亞胺混合，再與牛血清白蛋白混合，室溫攪拌，偶聯制
備得到食品紅10特異性抗原；將食品紅10特異性抗原包被于酶標板中，所述
酶標板的每個微孔內食品紅10特異性抗原的濃度為1-3μg/mL；
2)制備食品紅10特異性抗體：以步驟1)中合成的食品紅10特異性抗原
作為免疫原對小鼠進行免疫；免疫后，取血清效價高的小鼠，取其脾細胞與骨
髓瘤細胞SP2/0進行細胞融合；采用有限稀釋法篩選雜交瘤細胞，得到完全同
質的單克隆抗體和穩定的單克隆雜交瘤細胞株；并取不完全佐劑腹腔注射進行
致敏后的小鼠，將雜交瘤細胞混懸液注射到小鼠腹腔中，收集腹水，經辛酸-硫
酸銨沉淀法進行腹水純化，得到純化的食品紅10單克隆抗體；所述食品紅10
特異性抗體的濃度為1-3μg/mL。
7.根據權利要求6所述的食品紅10檢測試劑盒制備方法，其特征在于，
步驟1)中，制備食品紅10特異性抗原的具體方法為：將0.87g食品紅10和
1.01g三乙胺分散于100mL干燥二氯甲烷中，零攝氏度下加入0.5mL甲磺酰氯作
為活化試劑，室溫攪拌3.5h，食品紅10的醇羥基可轉化成甲磺酯基；隨后將
甲磺酯化食品紅10加入無水乙醇中，加入20倍量的液氨，回流攪拌5h，制得
能夠與蛋白質偶聯的食品紅10的半抗原；再將其與N-羥基丁二酰胺和碳二亞胺
混合，再與牛血清白蛋白混合，室溫攪拌1h，偶聯制備得到食品紅10特異性抗
原。
8.根據權利要求6所述的食品紅10檢測試劑盒制備方法，其特征在于，
步驟2)為：以步驟1)中合成的食品紅10特異性抗原作為免疫原對10周齡的
Balb/c小鼠進行免疫；首次免疫使用完全弗氏佐劑與食品紅10特異性抗原溶液
乳化，抗原濃度為0.4mg/mL，劑量為120μg/只，以后每次加強免疫使用不完
全弗氏佐劑與食品紅10特異性抗原溶液乳化，劑量同初次免疫；初次免疫兩周
后，每間隔10天加強免疫一次，共免疫5-10次，當抗體效價不再升高時，進
行最后一次免疫，最后一次不加免疫佐劑直接用食品紅10特異性抗原水溶液腹
腔注射，劑量同初次免疫；尾部取血檢測血清效價；取血清效價高的小鼠，在
無菌條件下，取其脾細胞按6:1比例與骨髓瘤細胞SP2/0進行細胞融合；采用
有限稀釋法篩選雜交瘤細胞，得到完全同質的單克隆抗體和穩定的單克隆雜交
瘤細胞株；并取Balb/c小鼠，于一周前采用不完全佐劑腹腔注射進行致敏，劑
量為0.5mL/只；將細胞濃度為1.5萬/mL的雜交瘤細胞混懸液注射到小鼠腹腔
中，劑量為0.5mL/只；接種雜交瘤細胞7～10天后，收集腹水，反復收集數次；
存于4℃冰箱保存；經辛酸-硫酸銨沉淀法進行腹水純化，得到純化的食品紅10
單克隆抗體。