1.一種無創幽門螺桿菌基因檢測試劑盒的引物,其特征在于:所述引物為5'-
TTGGGATAGCCATTGGAAACG-3'
3'-GTTCCGATACTGCCCATAGGC-5'。
2.權利要求1所述引物用于擴增的方法,其特征在于:該方法包括以下步驟
熔鏈:在92-96℃下進行8-10s;
退火延伸:在54-66℃下進行25-30s,退火延伸是在同樣的溫度下進行;
該兩個步驟按順序循環30cycle。
3.根據權利要求2所述引物用于擴增的方法,其特征在于:所述退火溫度為62℃。
4.一種無創幽門螺桿菌基因檢測試劑盒,其特征在于:包括權利要求1所述的引物,還
包括R2試劑、R3試劑,所述R2試劑為SYBRGreenTaqMIX,所述R3試劑為無菌蒸餾水。
5.一種無創幽門螺桿菌基因檢測試劑盒非診斷的檢測方法,其特征在于:該檢測方法
采用權利要求4所述的無創幽門螺桿菌基因檢測試劑盒,包括以下步驟:
(1)無創幽門螺桿菌基因檢測試劑盒配置:將引物用無菌蒸餾水稀釋到終濃度8-10μM,
再將稀釋后的引物、R2試劑、R3試劑分別包裝或預混合包裝得PCR擴增管,制得試劑盒;
(2)PCR模板制備:將糞便樣品處理或口腔樣本處理后制得PCR模板;
(3)試劑盒操作:將PCR模板加入預裝有試劑的PCR擴增管中,在PCR擴增儀上如權利要
求2或3所述的引物用于擴增的方法進行反應,得到擴增產物;
(4)檢測:a、定性PCR檢測:在普通PCR儀上擴增,取擴增產物在3%的瓊脂糖膠中進行電
泳,凝膠成像觀察結果;
b、定量PCR檢測:在實時熒光定量PCR儀上進行擴增,根據達到熒光閾值的循環數,確定
模板中幽門螺桿菌的數量。
6.根據權利要求5所述的一種無創幽門螺桿菌基因檢測試劑盒非診斷的檢測方法,其
特征在于:所述糞便樣品處理:取10-50g的糞便溶解到無菌水中混勻,然后利用梯度離心法
去除糞便中的雜質獲得上層清液,再將上層清液用離心法獲得菌沉淀,再用無菌水將菌沉
淀溶解獲得菌溶液,取菌溶液作為PCR模板。
7.根據權利要求5所述的一種無創幽門螺桿菌基因檢測試劑盒非診斷的檢測方法,其
特征在于:所述口腔樣本的處理為用無菌棉簽在口腔內旋轉蘸取舌胎至咽喉處的口腔粘
液,用無菌水溶解粘液得菌溶液,取菌溶液作為PCR模板。
8.根據權利要求5所述的一種無創幽門螺桿菌基因檢測試劑盒非診斷的檢測方法,其
特征在于:引物、R2試劑、R3試劑和PCR模板體積為:引物為0.3-0.6份,R2試劑為8-12份,R3
試劑為6-9份,PCR模板為1-3份。
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