本發明公開了一種檢測EB病毒的多重熒光定量PCR方法及試劑盒，所述試劑盒包括檢測EBNA1，Bam HI?W基因及人內參基因的檢測引物對和探針，其序列依次如SEQ ID NO：1～9所示。本發明通過綜合上述EBNA1基因和Bam HI?W基因兩個基因優勢并且加上人內參基因做多重熒光定量PCR的方法，即用內參基因來檢測標本DNA提取效果可行性，用雙目標基因實現對EB病毒精準定性和定量分析，與現有的商用試劑盒相比，具有更高的靈敏度和特異性，且本發明的熒光定量PCR技術具有操作簡單、時間短、試劑耗材來源廣、成本低、熒光PCR體系試劑通性強等優勢，具有較大的應用前景。

1.一種用于檢測EB病毒的多重熒光定量PCR引物和探針，其特征在于，包括檢測EBNA1基因的引物對EB-F/R和探針EB-VIC，檢測Bam HI-W基因的引物對BW-F/R和探針BW-FAM及檢測內參基因β-actin的引物對UF/R和探針TU-ROX，其序列依次如SEQ ID NO：1～9所示；所述EBNA1基因，Bam HI-W基因和內參基因探針的5’端分別標記有熒光素VIC，FAM和ROX。2.權利要求1所述引物和探針在檢測EB病毒的非疾病診斷目的或在制備EB病毒檢測試劑盒中的應用。3.一種檢測EB病毒的非疾病診斷目的的多重熒光定量PCR方法，其特征在于，包括如下步驟：S1.提取樣本基因組DNA；S2.用權利要求1所述引物和探針SEQ ID NO：1～9對S1的基因組DNA進行多重熒光定量PCR擴增反應，得到PCR擴增曲線；S3.根據S2的擴增曲線進行結果分析。4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟S2所述多重熒光定量PCR的擴增體系中各組分總濃度如下所示：10x ExTaq bμffer 1x～5x，MgCL₂ 0.2～2mmol/L，dNTP 100～400μmol/L，BSA 100～300μg/μL，甜菜堿1～3mol/L，EB-F 8pg/μL，EB-R 8pg/μL，EB-VIC4pg/μL，BW-F 4pg/μL，BW-R 4pg/μL，BW-FAM 2pg/μL，UF 2pg/μL，UR 2pg/μL，TU-ROX 1pg/μL，ExTaq酶0.1～0.2U/μL，ddH₂0補充至25μL。5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟S2所述多重熒光定量PCR的擴增程序為：95℃5min；94℃30s，62℃30s，共45個循環。6.權利要求3～5任一所述方法在制備EB病毒檢測試劑盒中的應用。7.一種檢測EB病毒的試劑盒，其特征在于，包含權利要求1所述引物和探針。8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，還包含EB病毒陽性質粒。9.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，還包含熒光定量PCR所需的試劑。10.權利要求7～9任一項所述試劑盒在EB病毒檢測中的非疾病診斷目的的應用。