1.一種檢測肝癌標記核酸分子的試劑盒,其特征在于:包括盒體、提取RNA的試劑、逆轉
錄試劑、PCR擴增試劑、無RNA酶的純水、陰性質控品、含有肝癌標記核酸分子的陽性質控品
以及用于分隔收集所有試劑的試劑瓶或試劑管;
其中,所述逆轉錄試劑包括:肝癌標記核酸分子的逆轉錄引物和逆轉錄酶;所述肝癌標
記核酸分子逆轉錄引物的序列為:
5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGACGGTTTTACCAGACAGTATTA-3’;
所述逆轉錄酶為M-MLV逆轉錄酶或AMV逆轉錄酶;
所述PCR擴增試劑包括:肝癌標記核酸分子正向引物、肝癌標記核酸分子反向引物、帶
有熒光標記的肝癌標記核酸分子寡核苷酸探針、核酸擴增酶;
所述肝癌標記核酸分子正向引物的序列為:5’-ACACTCCAGCTGGGTAATACTGTCTGGTA-3’;
所述肝癌標記核酸分子反向引物的序列為:5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGC-3’;
所述肝癌標記核酸分子寡核苷酸探針的序列為:5’X-TTCAGTTGAGACGGTTTTACC-Y3’;
其中,X或Y修飾在能夠與靶多核苷酸結合的寡核苷酸片段兩末端,且分別為熒光發生
基團或熒光淬滅基團;
所述盒體的內底壁上設置有第一試劑架、第二試劑架和第三試劑架;
裝有所述逆轉錄試劑的試劑瓶或試劑管設置在所述第一試劑架上;裝有所述PCR擴增
試劑的試劑瓶或試劑管設置在所述第二試劑架上;裝有無RNA酶的純水、陰性質控品、陽性
質控品的試劑瓶或試劑管設置在所述第三試劑架上。
2.根據權利要求1所述的檢測肝癌標記核酸分子的試劑盒,其特征在于:
所述第一試劑架、所述第二試劑架以及所述第三試劑架上均設置有多個用于裝載試劑
瓶或試劑管的通孔。
3.根據權利要求1-2任一項所述的檢測肝癌標記核酸分子的試劑盒,其特征在于:
所述第一試劑架、所述第二試劑架以及所述第三試劑架與所述底壁之間設置有泡沫
層。
4.根據權利要求3所述的檢測肝癌標記核酸分子的試劑盒,其特征在于:
所述用于提取RNA的試劑為Trizol試劑或磁珠法抽提RNA所用的試劑。
5.根據權利要求4所述的檢測肝癌標記核酸分子的試劑盒,其特征在于,所述逆轉錄試
劑還包括作為內參基因檢測的U6 SnRNA逆轉錄引物;
所述U6 SnRNA逆轉錄引物的序列為:
5’-CACGAATTTGCGTGTCATCC-3’。
6.根據權利要求5所述的檢測肝癌標記核酸分子的試劑盒,其特征在于,所述PCR擴增
試劑還包括:
作為內參檢測的U6 SnRNA的正向引物、U6 SnRNA的反向引物、以及U6 SnRNA的寡核苷
酸探針;
所述U6 SnRNA的正向引物的序列為:
5’-GTGCTCGCTTCGGCAGC-3’;
所述U6 SnRNA的反向引物的序列為:
5’-CACGAATTTGCGTGTCATCC-3’;
所述U6 SnRNA的寡核苷酸探針的序列為:
5’X-CGCAGGGGCCATGCTAAT-Y-3’;
其中,X或Y修飾在能夠與靶多核苷酸結合的寡核苷酸片段兩末端,且分別為熒光發生
基團或熒光淬滅基團。
7.根據權利要求1所述的檢測肝癌標記核酸分子的試劑盒,其特征在于,
所述陰性質控品為牛血清蛋白或生理鹽水溶液;
所述陽性質控品為含有肝癌標記核酸分子的溶液。
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