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一種人類ALDH2基因多態性檢測試劑盒及其制備方法和應用

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-09-01
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201811034949.8 
  • 技術(專利)名稱 一種人類ALDH2基因多態性檢測試劑盒及其制備方法和應用 
  • 項目單位 武漢康錄生物技術股份有限公司
  • 發明人 王寧,付金玲,李倩,李雪梅,葉倫,程弘夏,陳剛 
  • 行業類別 醫藥制造-制藥設備
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 鄭揚煩
  • 發布時間 2021-09-01  
  • 01

    項目簡介

    本發明屬于生物技術領域,具體涉及一種人類ALDH2基因多態性檢測試劑盒及其制備方法和應用。所述試劑盒由用于擴增ALDH2基因G1510A位點的PCR預混反應液、陽性對照品及陰性對照品組成,所述PCR預混反應液包含用于擴增各位點的特異性引物序列組、探針組和PCR反應液,所述特異性引物組由普通的外引物和帶熒光標簽的特異性的ARMs引物組成。本發明所述試劑盒用于檢測人類ALDH2基因多態性具有靈敏度高、特異性高、操作簡便、結果可靠等優點,且能在1小時內完成檢測,并且結果判讀簡單客觀。
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  • 02

    說明書

    1.一種檢測試劑盒,其特征在于,所述試劑盒由用于擴增ALDH2基因rs671位點的PCR預混反應液、陽性對照品及陰性對照品組成;所述PCR預混反應液包括:引物組、探針組、以及PCR反應液;所述陽性對照品包含:ALDH2基因rs671位點突變型質粒、ALDH2基因rs671位點野生型質粒以及內參基因質粒DNA;所述陰性對照品包括不包含內標基因和目的基因位點的重組質粒;所述引物組由普通的外引物和帶熒光標簽的特異性的ARMs引物組成,具體序列如下:用于擴增ALDH2基因rs671位點的特異性引物序列如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.4所示,其中SEQ ID NO.2所示引物的5’端攜帶FAM熒光基團,SEQ ID NO.4所示引物的5’端攜帶VIC熒光基團;用于內控的引物序列如SEQ ID NO.5~SEQ ID NO.6所示;所述探針組由特異性taqman-MGB探針和攜帶淬滅基團的鎖核酸探針組成,核苷酸序列如SEQ ID NO.7~SEQ ID NO.9所示,具體形式如下:內控-P:5’-ROX-ACCACCACGGCCGAGC-MGB-BHQ-3’野生型淬滅基團鎖核酸:5’-BHQ-ACGATGACAAGGGAT-3’突變型淬滅基團鎖核酸:5’-BHQ-TCATCAATGTATCTT-3’。2.根據權利要求1所述檢測試劑盒,其特征在于,所述PCR預混反應液中,探針組內taqman-MGB探針的濃度為50~100nM,攜帶淬滅基團的鎖核酸探針的濃度均為100~400nM;用于擴增ALDH2基因rs671位點的不帶熒光基團的引物濃度均為100~400nM,帶熒光基團的引物濃度均為50~100nM;用于內控的引物的濃度均為100~400nM。3.根據權利要求1所述檢測試劑盒,其特征在于,所述PCR反應液包括Premix qPCRmix和TE緩沖液。4.權利要求1~3任一項所述檢測試劑盒在制備用于檢測人類ALDH2基因rs671位點多態性產品中的應用。5.根據權利要求4所述應用,其特征在于,具體的檢測方法包括如下步驟:(1)采用基因組DNA提取試劑盒提取待測人外周血的基因組DNA作為待檢測樣本;(2)熒光定量檢測:向反應管中加入PCR預混反應液和待測樣本DNA;同時設置陽性對照組和陰性對照組,然后將反應管置于熒光PCR儀進行PCR擴增反應,并采集FAM、VIC和ROX熒光信號;(3)PCR擴增反應結束后,根據所采集的熒光信號起線情況進行結果判定。6.根據權利要求5所述的應用,其特征在于,步驟(1)中將所述待檢測樣本DNA稀釋到濃度為0.1~100ng/μL,再進行PCR擴增反應。7.根據權利要求5所述的應用,其特征在于,步驟(2)所述PCR擴增反應的條件為:95℃1分鐘預變性;15個循環:95℃5秒,61℃32秒,不收集熒光;30個循環:95℃5秒,61℃32秒,收集熒光。8.根據權利要求5所述的應用,其特征在于,步驟(3)所述結果判定的準則為:①當陽性對照組均有FAM、VIC、ROX熒光信號起線,陰性對照組均無FAM、VIC、ROX熒光起線,待檢測樣本有ROX熒光信號起線時,判定實驗成功,可以進行后續分型判定;②根據檢測樣本的FAM、VIC熒光信號判斷ALDH2的分型:VIC熒光信號起線ALDH2基因rs671位點分型為純合野生型;FAM熒光信號起線,ALDH2基因rs671位點分型為純合突變型;VIC、FAM熒光信號均起線,ALDH2基因rs671位點分型為雜合突變型。
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專利技術附圖

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