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一種乙型肝炎病毒e抗原的納米磁微粒化學發光測定試劑盒及其制備方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-10-03
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201210550172.7 
  • 技術(專利)名稱 一種乙型肝炎病毒e抗原的納米磁微粒化學發光測定試劑盒及其制備方法 
  • 項目單位 蘇州浩歐博生物醫藥有限公司
  • 發明人 于大為,程曉蕾 
  • 行業類別 藥品-生物藥品
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 沈揚鵬
  • 發布時間 2021-10-03  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及一種乙型肝炎病毒e抗原的納米磁微粒化學發光測定試劑盒及其制備方法和檢測方法,試劑盒包括含有熒光素標記的乙型肝炎病毒e抗原抗體的溶液、包被有熒光素抗體的磁微粒的懸浮液,以及含有堿性磷酸酶標記的乙型肝炎病毒e抗原抗體的溶液。本發明使得能夠以更低成本和更高準確度和精密度對乙型肝炎病毒e抗原進行定量檢測。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種乙型肝炎病毒e抗原的納米磁微粒化學發光測定試劑盒,所述試劑盒包括:第一試劑:含熒光素標記的乙型肝炎病毒e抗原抗體的溶液;第二試劑:含堿性磷酸酶標記的乙型肝炎病毒e抗原抗體的溶液;磁分離劑:含包被著熒光素抗體的磁微粒的懸浮液;所述堿性磷酸酶標記的乙型肝炎病毒e抗原抗體由堿性磷酸酶與乙型肝炎病毒e抗原抗體通過交聯劑4-(N-馬來酰亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺酯和2-亞氨基硫烷鹽酸鹽連接構成;所述第一試劑中的熒光素標記的乙型肝炎病毒e抗原抗體的濃度為0.5~1μg/mL,所述第一試劑的pH為7-9;所述第二試劑中的堿性磷酸酶標記的乙型肝炎病毒e抗原抗體的濃度為0.5~1μg/mL,所述第二試劑的pH為7-9;所述的乙型肝炎病毒e抗原的納米磁微粒化學發光測定試劑盒采用以下制備方法制備得到,所述制備方法包括分別制備所述含有熒光素標記的乙型肝炎病毒e抗原抗體的溶液、所述含有堿性磷酸酶標記的乙型肝炎病毒e抗原抗體的溶液以及所述包被有熒光素抗體的磁微粒的懸浮液的步驟,所述含有堿性磷酸酶標記的乙型肝炎病毒e抗原抗體的溶液的制備過程如下:①取乙型肝炎病毒e抗原抗體,加入偶聯劑2-IT溶液溶解,室溫靜置10min~30min,加入甘氨酸溶液,室溫靜置2~10min,用G-25凝膠純化柱除鹽,收集活化后的乙型肝炎病毒e抗原抗體,于2-8℃保存備用;②取濃度大于或等于5mg/mL的堿性磷酸酶溶液,加入4-(N-馬來酰亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺酯溶液,室溫靜置20~40min,用G-25凝膠柱除鹽,收集活化后堿性磷酸酶,于2-8℃保存備用;③將上述步驟①所得活化后的乙型肝炎病毒e抗原抗體與步驟②所得活化后的堿性磷酸酶混合,靜置反應,使生成堿性磷酸酶標記的乙型肝炎病毒e抗原抗體,反應結束后,將反應液用Supperdex200凝膠純化柱純化,選擇具有適當pH值的緩沖液調整濃度和pH值即得所述第二試劑;其中,所述的乙型肝炎病毒e抗原抗體、所述堿性磷酸酶的純度均大于或等于95wt%,且所述堿性磷酸酶的比活性超過1000u/mg;其中,所述第一試劑的制備方法如下:配制含有熒光素的pH為9~10的緩沖液,然后按照熒光素與乙型肝炎病毒e抗原抗體的分子比為20~200:1的比例,將所述含有熒光素的pH為9~10的緩沖液與乙型肝炎病毒e抗原抗體的pH為9~10的緩沖液混合,混勻后,室溫靜置反應,然后將反應液通過G-25凝膠柱進行分離,除去游離的熒光素,得到含有熒光素標記的乙型肝炎病毒e抗原抗體的溶液,接著用具有適當pH值的緩沖液調整濃度和pH,即得第一試劑;所述磁分離劑的制備方法如下:使含有羧基活性基團的磁微粒與熒光素抗體在偶聯劑碳二亞胺的存在下,室溫反應2~18小時,反應結束,磁分離,去上清,用具有適當pH值的緩沖液調整pH和濃度,即得所述的磁分離劑;其中所述的磁微粒具有超順磁性,其直徑為0.5~2μm,每克磁微粒上所帶的羧基活性基團的含量大于或等于0.4mmol;所述的熒光素抗體為單克隆抗體或多克隆抗體,純度大于或等于90wt%,稀釋效價大于1:100萬;所述的具有適當pH值的緩沖液為含有0.5%牛血清白蛋白、pH8.0的TRIS緩沖液。2.一種如權利要求1所述的乙型肝炎病毒e抗原的納米磁微粒化學發光測定試劑盒的制備方法,其包括分別制備所述含有熒光素標記的乙型肝炎病毒e抗原抗體的溶液、所述含有堿性磷酸酶標記的乙型肝炎病毒e抗原抗體的溶液以及所述包被有熒光素抗體的磁微粒的懸浮液的步驟,其特征在于:所述含有堿性磷酸酶標記的乙型肝炎病毒e抗原抗體的溶液的制備過程如下:①取乙型肝炎病毒e抗原抗體,加入偶聯劑2-IT溶液溶解,室溫靜置10min~30min,加入甘氨酸溶液,室溫靜置2~10min,用G-25凝膠純化柱除鹽,收集活化后的乙型肝炎病毒e抗原抗體,于2-8℃保存備用;②取濃度大于或等于5mg/mL的堿性磷酸酶溶液,加入4-(N-馬來酰亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺酯溶液,室溫靜置20~40min,用G-25凝膠柱除鹽,收集活化后堿性磷酸酶,于2-8℃保存備用;③將上述步驟①所得活化后的乙型肝炎病毒e抗原抗體與步驟②所得活化后的堿性磷酸酶混合,靜置反應,使生成堿性磷酸酶標記的乙型肝炎病毒e抗原抗體,反應結束后,將反應液用Supperdex200凝膠純化柱純化,選擇具有適當pH值的緩沖液調整濃度和pH值即得所述第二試劑;其中,所述的乙型肝炎病毒e抗原抗體、所述堿性磷酸酶的純度均大于或等于95wt%,且所述堿性磷酸酶的比活性超過1000u/mg;所述第一試劑的制備方法如下:配制含有熒光素的pH為9~10的緩沖液,然后按照熒光素與乙型肝炎病毒e抗原抗體的分子比為20~200:1的比例,將所述含有熒光素的pH為9~10的緩沖液與乙型肝炎病毒e抗原抗體的pH為9~10的緩沖液混合,混勻后,室溫靜置反應,然后將反應液通過G-25凝膠柱進行分離,除去游離的熒光素,得到含有熒光素標記的乙型肝炎病毒e抗原抗體的溶液,接著用具有適當pH值的緩沖液調整濃度和pH,即得第一試劑;所述磁分離劑的制備方法如下:使含有羧基活性基團的磁微粒與熒光素抗體在偶聯劑碳二亞胺的存在下,室溫反應2~18小時,反應結束,磁分離,去上清,用具有適當pH值的緩沖液調整pH和濃度,即得所述的磁分離劑;其中所述的磁微粒具有超順磁性,其直徑為0.5~2μm,每克磁微粒上所帶的羧基活性基團的含量大于或等于0.4mmol;所述的熒光素抗體為單克隆抗體或多克隆抗體,純度大于或等于90wt%,稀釋效價大于1:100萬;其中,所述的具有適當pH值的緩沖液為含有0.5%牛血清白蛋白、pH8.0的TRIS緩沖液。
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