本發明提供通過采用清除分子諸如含有肼和含有酰肼的化合物來改善核酸或者蛋白質從保存于液體細胞防腐保存液中的樣品中回收的方法和物質。本發明也提供包含含有肼和含有酰肼的化合物的裂解溶液以及包含所述化合物的試劑盒。

1.從保存于含有羰基的液體細胞防腐保存液中的生物樣品提取靶標核
酸的方法，該方法包括：
A)使所述生物樣品與包含清除劑的清除溶液接觸，所述清除劑包含至少
一個末端肼基；
B)在足以使核酸從生物樣品釋放的條件下處理所述生物樣品；以及
C)分離所述靶標核酸。
2.權利要求1的方法，其中所述清除劑選自：
a)式I的化合物：

b)式II的化合物：

其中：
R¹為C₁–C₁₂烷基；C₁–C₁₂烯基；C₃–C₆環烷基；C₃–C₆環烯基；C₆–C₁₀
芳基；和C₆–C₁₀雜芳基，其中R¹為任選取代的由此增加所述清除劑在水中
的溶解度；
R²在每種情況下可相同或者不同，且選自：

m為選自0和1的整數；且
n為選自1和2的整數，
其中所述清除劑為任選修飾的由此增加在水中的溶解度。
3.權利要求2的方法，其中所述清除劑為式I的化合物，其中R¹為
C₁–C₁₂烷基且m為1。
4.權利要求3的方法，其中R¹為C₁–C₆烷基。
5.權利要求3的方法，其中R¹為C₂–C₄烷基。
6.權利要求2的方法，其中所述清除劑為式II的化合物，其中R¹為
C₁–C₁₂烷基；R²為且n為2。
7.權利要求6的方法，其中R¹為C₁–C₆烷基。
8.權利要求6的方法，其中R¹為C₂–C₄烷基。
9.權利要求1的方法，其中所述清除劑選自氨基脲；氨基硫脲；卡巴
肼；硫代卡巴肼；N-氨基胍及其鹽；N,N-二氨基胍及其鹽；乙酰肼；己二酸
二酰肼；琥珀酸二酰肼；甲酰肼；馬來酸二酰肼；丙二酸二酰肼；苯磺酰肼；
甲苯磺酰肼；和甲磺酰肼。
10.權利要求1至9中任一項的方法，其中所述清除溶液包含0.1M至
1.0M的所述清除劑。
11.權利要求1至9中任一項的方法，其中所述清除溶液包含0.1M至
0.5M的所述清除劑。
12.權利要求1至9中任一項的方法，其中所述清除溶液包含0.2M至
0.4M的所述清除劑。
13.權利要求1至9中任一項的方法，其中所述清除溶液包含0.3M己
二酸二酰肼或者0.3M琥珀酸二酰肼。
14.權利要求1至9中任一項的方法，其中所述清除溶液直接加至所述
液體細胞防腐保存液。
15.權利要求1至9中任一項的方法，其中所述清除溶液進一步包含蛋
白消化酶。
16.權利要求1至9中任一項的方法，其中在所述靶標核酸從生物樣品
釋放之前，使所述生物樣品與所述清除溶液接觸。
17.權利要求1至9中任一項的方法，其中通過在裂解溶液的存在下裂
解所述生物樣品將所述靶標核酸從生物樣品釋放。
18.權利要求17的方法，其中所述清除溶液為裂解溶液。
19.權利要求17的方法，其中在將裂解溶液加至生物樣品之前、之后
或者同時將所述清除溶液加至生物樣品。
20.權利要求1的方法，其中：
C)所述靶標核酸通過以下方法來分離，所述方法包括：
(i)使用第二核酸將核酸探針與所述靶標核酸雜交以形成核酸雜交
物；
(ii)使所述核酸雜交物與固相結合；
(iii)分離所述固相；和
(iv)從所述固相洗脫所述靶標核酸。
21.權利要求20的方法，其中所述核酸雜交物為DNA:RNA雜交物且
其中通過以下方法使所述DNA:RNA雜交物與固相結合，所述方法包括：使
所述核酸雜交物與能夠結合所述核酸雜交物的抗體接觸，其中所述抗體與所
述固相結合或者適于與所述固相結合。
22.權利要求1的方法，其中：
C)所述靶標核酸通過以下方法來分離，所述方法包括：
(i)使所述靶標核酸與陰離子交換基質結合；和
(ii)從所述陰離子交換基質洗脫所述靶標核酸。
23.權利要求22的方法，其中所述靶標核酸在20℃至70℃的洗脫溫
度從所述陰離子交換基質洗脫。
24.權利要求22或23的方法，其中所述靶標核酸在50℃至60℃的
洗脫溫度從所述陰離子交換基質洗脫。
25.裂解溶液，包含：
(i)緩沖劑；
(ii)洗滌劑；
(iii)包含至少一個末端肼基的清除劑；且
(iv)任選的蛋白消化酶。
26.權利要求25的裂解溶液，其中所述清除劑選自：
a)式I的化合物：

b)式II的化合物：

其中：
R¹選自：C₁–C₁₂烷基；C₁–C₁₂烯基；C₃–C₆環烷基；C₃–C₆環烯基；C₆–C₁₀
芳基；和C₆–C₁₀雜芳基，其中R¹為任選取代的由此增加清除劑在水中的溶
解度；
R²在每種情況下可相同或者不同，且選自：

m為選自0和1的整數；且
n為選自1和2的整數，
其中所述清除劑為任選修飾的由此增加在水中的溶解度。
27.權利要求25的裂解溶液，其中所述清除劑選自氨基脲；氨基硫脲；
卡巴肼；硫代卡巴肼；N-氨基胍及其鹽；N,N-二氨基胍及其鹽；乙酰肼；己
二酸二酰肼；琥珀酸二酰肼；甲酰肼；馬來酸二酰肼；丙二酸二酰肼；苯磺
酰肼；甲苯磺酰肼；和甲磺酰肼。
28.權利要求25至27中任一項的裂解溶液，包含0.1M至1.0M的所述
清除劑。
29.權利要求25至27中任一項的裂解溶液，包含0.1M至0.5M己二酸
二酰肼或者0.1M至0.5M琥珀酸二酰肼。
30.試劑盒，其用于從保存于液體細胞防腐保存液中的生物樣品回收靶
標核酸，所述試劑盒包含權利要求25至29中任一項的裂解溶液且任選包含
至少一種選自下述的額外組分：蛋白消化酶、固相、能夠與所述靶標核酸雜
交的核酸探針，以及抗體。