本發(fā)明屬于不飽和脂肪酸的檢測領域，具體涉及一種檢測血液樣品中的DHA含量的方法及試劑盒。本發(fā)明方法采用HPLC?MS/MS檢測血液樣品中DHA含量，包括以下步驟：(1)血液樣品預處理；(2)標準工作液的配制；(3)HPLC?MS/MS檢測。本發(fā)明首次實現(xiàn)了應用HPLC?MS/MS技術對血清樣本中的DHA精確檢測的目的，降低了基質(zhì)效應，該方法操作簡便快速，通量高成本低，有效監(jiān)測人體內(nèi)DHA水平，對DHA的合理、安全補充具有指導意義，易于臨床推廣及普及。

1.一種檢測樣品中DHA含量的方法，其特征在于，采用HPLC-MS/MS檢測血液樣品中DHA
含量，包括以下步驟：
(1)血液樣品預處理；
(2)標準工作液的配制；
(3)HPLC-MS/MS檢測；
所述血液樣品是血漿或血清；所述血液樣品前處理方法為：向200μl血清樣本中加入
1ml乙腈/37％鹽酸體積比為4:1的溶液，渦旋震蕩后在90℃中孵育2h，隨后冷卻至室溫，加
入2ml正己烷并渦旋振蕩20s，室溫下靜置5min后離心，3000rpm，1min；取溶液最上層部分至
樣品瓶中，氮氣吹干，將樣品復溶于200μl體積比為180：20的甲醇水溶液中，0.2μm濾膜過
濾，獲得待測樣本。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述HPLC-MS/MS的條件為：色譜條件：流動
相A：含0.05％甲酸pH值為3的HPLC級水；流動相B：含0.05％甲酸且pH值為3的甲醇；梯度洗
脫；質(zhì)譜條件：負離子電噴霧離子化的多離子反應監(jiān)測。
3.根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脫條件為：0～3min，70％B，3～
4min，90％B，4～6min，90％B，6～9min，100％B，9～13min，70％B，流速250μL/min，進樣量，
20μL；所述質(zhì)譜條件為：采用負離子電噴霧離子化的多離子反應監(jiān)測模式，霧化氣：60kPa，
加熱氣：50kPa，氣簾氣：20kPa，噴霧電壓：4.5kV，去溶劑溫度：450℃。
4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述標準工作液的配制方法為：以水配制
100μg/mL標準品儲備液，然后用牛血清白蛋白甲醇溶液制備7個梯度，分別為100，200，500，
1000，5000，10000，20000，50000ng/ml；標準溶液分裝于1.5mL棕色瓶中，-20℃保存?zhèn)溆谩?br/>5.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于，所述牛血清蛋白甲醇溶液濃度為5％m/v。
6.一種試劑盒，其特征在于，包括不同濃度的標準溶液，甲醇，乙腈，己烷，體積比為
180:20的甲醇水溶液，乙腈/37％鹽酸體積比為4:1溶液，含0.05％甲酸的甲醇溶液，含
0.05％甲酸的水溶液以及質(zhì)控品。
7.根據(jù)權利要求6所述的試劑盒在檢測DHA含量中的應用。
8.根據(jù)權利要求6所述的試劑盒在檢測血液樣品中DHA含量中的應用。
9.根據(jù)權利要求8所述的應用，其特征在于，所述血液樣品為血清。