本發明公開了一種適用于規模化生產重組人源膠原蛋白的畢赤酵母發酵培養基。本發明的培養基中添加了0.01～10g/L代謝調節劑，能夠調節畢赤酵母的新陳代謝，加快重組蛋白的表達，縮短發酵周期，降低能耗，減少出錯風險，保證穩定的工業化生產。使用本發明的培養基，在1000L發酵罐上規模化生產重組人源膠原蛋白，甲醇誘導周期縮短了20％，重組人源膠原蛋白的表達量提高了16.5％。本發明的畢赤酵母發酵培養基特別適用于工業化高密度發酵表達重組人源膠原蛋白的畢赤酵母甲醇誘導階段，能夠有效降低生產成本，產生顯著的經濟效益，對于重組人源膠原蛋白的工業化生產具有十分重要的實際意義。

1.一種適用于規模化生產重組人源膠原蛋白的畢赤酵母發酵方法，其包括：將菌種液按10％接種量加到含有500L發酵培養基的1000L發酵罐中，調節攪拌轉 速200-600rpm、罐壓0.2-1.0bar、調節空氣流量使溶氧＞30％；當碳源耗盡后， 溶氧陡然上升，開始流加50％甘油，補充碳源，至菌體濕重為216g/L，停止補加50％ 甘油；甘油耗盡后開始流加甲醇，作為新的碳源，進入甲醇誘導培養階段，通過調節轉 速、罐壓、空氣流量和流加甲醇速度使溶氧＞20％，每8小時進行取樣，測定菌 體濕重和重組人源膠原蛋白表達量，誘導發酵96h后，結束發酵，收集發酵液，離心獲 得發酵液上清，經HPLC檢測，最終重組人源膠原蛋白濃度為18.4g/L，其中，所述發酵培養基：85％H₃PO₄ 26.7mL/L；CaSO₄·2H₂O 1.175g/L；K₂SO₄ 18.2g/L；MgSO₄·7H₂O 14.9g/L；KOH 4.13g/L；甘油40.0g/L；PTM1 4.35mL/L；丙酮酸鈉 0.5g/L；所述畢赤酵母為巴斯德畢赤酵母Pichia pastoris，保藏編號為CGMCC No.5021。