一種重組枯草芽孢桿菌發酵制備高產亮氨酸氨肽酶的方法，屬于酶制劑、發酵技術領域。本發明將培養基優化和發酵過程控制組合優化，得出適合重組枯草芽孢桿菌培養方法；將重組枯草芽孢桿菌接入種子培養基后，搖床培養到對數生長期，接種一定量的種子液到調整后的發酵培養基中，用發酵罐進行發酵培養，每3h取樣測定酶活力等參數。本發明采用組合優化的策略對重組枯草芽孢桿菌發酵產亮氨酸氨肽酶的條件進行了優化，將發酵培養基和發酵培養條件組合起來優化，使得重組枯草芽孢桿菌發酵產亮氨酸氨肽酶的能力得到了大幅度的提高，亮氨酸氨肽酶的酶活力達到605 U/mL。

1.一種重組枯草芽孢桿菌發酵制備高產亮氨酸氨肽酶的方法，其特征在于發酵罐發酵工藝具體步驟為：（1）種子液的制備：將-40℃甘油管保存的重組枯草芽孢桿菌菌種Bacillus subtilis WB600接入到種子培養基中，使用回轉式恒溫搖床進行培養，控制搖床轉速為220rpm，培養溫度為37℃，培養10h，得到種子液；所述種子培養基為氯化鈉10g/L、胰蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L；重組枯草芽孢桿菌，含連接了來源于枯草芽孢桿菌Zj016氨肽酶基因全序列的PMA5質粒，宿主菌Bacillus subtilis WB600；（2）發酵培養：將培養好的種子液以5％的量接種到7L發酵罐中，發酵罐的裝液量為4L，通入無菌空氣，攪拌轉速250-450rpm，通氣比為1.2︰1，溶氧與攪拌轉速偶聯，維持最低溶氧在30％，發酵培養30h；發酵培養過程的前12h的發酵培養溫度為37℃，12h后發酵培養溫度調整為30℃；發酵培養到15h時，一次性補加500g/L的葡萄糖補料液，使得發酵液中還原糖濃度為5g/L；所述發酵培養基為可溶性淀粉20 g/L、豆粕20 g/L、酵母膏18 g/L、甘油2 mL/L、磷酸氫二鉀6 g/L，氯化鈷0.6 mmol/L、用去離子水配制；產酶促進劑為：氯化鉀0.1 mol/L、谷氨酸鈉0.6％、酒石酸鉀0.7％、吐溫-80 2.4 mL/L；（3）參數測定：發酵過程中，每隔3h取樣，測定亮氨酸氨肽酶酶活力、生物量。