本發(fā)明公開了一種半成熟樹突狀細(xì)胞的體外制備方法，具體為收集小鼠骨髓細(xì)胞懸液，離心，裂解，細(xì)胞重懸于RPMI 1640完全培養(yǎng)基中，加入10-20μg/LrmGM-CSF、2.5-10μg/L rmIL-4和1-5mg/L Jagged-1/Fc，孵育，收集疏松貼壁細(xì)胞，用完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，加入等劑量的rmGM-CSF、rmIL-4和Jagged-1/Fc，收集疏松貼壁細(xì)胞，第6-8d加入半劑量的rmGM-CSF和rmIL-4，等劑量Jagged-1/Fc，第10-12d收獲疏松貼壁細(xì)胞，即semi-mature DCs。這種細(xì)胞只用Jagged-1/Fc處理，能導(dǎo)致同種異基因淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答的能力減弱，有利于誘導(dǎo)免疫耐受。

1.一種半成熟樹突狀細(xì)胞的體外制備方法，其特征在于包括以下步驟：
（1）冰浴上收集小鼠骨髓細(xì)胞懸液，離心棄上清；
（2）將步驟（1）離心得到的細(xì)胞重懸于磷酸緩沖液中，加入細(xì)胞懸液體
積15-20倍的紅細(xì)胞裂解液，37.0℃避光作用8-10min，然后離心；
（3）將步驟（2）離心得到的細(xì)胞重懸于含10%胎牛血清的RPMI?1640完全
培養(yǎng)基中；
（4）在步驟（3）得到的細(xì)胞懸液中加入10-20μg/L重組小鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)
胞集落刺激因子rmGM-CSF、2.5-10μg/L重組小鼠白細(xì)胞介素4rmIL-4和1-5
mg/L重組嵌合蛋白Jagged-1/Fc；
（5）置于培養(yǎng)箱中孵育；
（6）隔天1次，重復(fù)以下操作：去除上層懸浮細(xì)胞，收集疏松貼壁細(xì)胞，
離心棄上清，用含10%胎牛血清的RPMI?1640完全培養(yǎng)基重懸離心得到的細(xì)胞，
加入同步驟（4）等劑量的rmGM-CSF、rmIL-4和Jagged-1/Fc，然后置于培養(yǎng)箱
中繼續(xù)孵育；
（7）第6-8天開始，加入與步驟（4）相比半劑量的rmGM-CSF和rmIL-4，
Jagged-1/Fc劑量不變，其余同步驟（6）；
（8）第10-12天棄底層牢固貼壁細(xì)胞，收獲疏松貼壁細(xì)胞，即Jagged-1誘導(dǎo)
的半成熟樹突狀細(xì)胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種半成熟樹突狀細(xì)胞的體外制備方法，其特征在
于：所述步驟（1）、（6）中離心條件為4℃，300×g，離心3-5min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種半成熟樹突狀細(xì)胞的體外制備方法，其特征在
于：所述步驟（2）中磷酸緩沖液的加入量為能重懸細(xì)胞的最小體積。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種半成熟樹突狀細(xì)胞的體外制備方法，其特征在
于：所述步驟（2）中離心時用冷磷酸緩沖液作為洗滌溶液，離心洗滌3次，離
心條件均為4℃，300×g，離心3-5min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種半成熟樹突狀細(xì)胞的體外制備方法，其特征在
于：所述步驟（3）中細(xì)胞重懸后細(xì)胞密度為（2-5）×10⁹/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種半成熟樹突狀細(xì)胞的體外制備方法，其特征在
于：所述步驟（5）、（6）、（7）中培養(yǎng)箱內(nèi)條件為37.0℃、5%CO₂。