本發(fā)明提供了一種體外完成細(xì)胞減數(shù)分裂的方法，包括以下步驟：1)將原始生殖細(xì)胞或原始生殖細(xì)胞樣細(xì)胞(PGCLCs)與睪丸細(xì)胞以1：1的比例混合后在含有減數(shù)分裂啟動因子的細(xì)胞培養(yǎng)基中共培養(yǎng)至形成細(xì)胞集落并檢測到減數(shù)分裂啟動基因表達(dá)，得到啟動減數(shù)分裂的細(xì)胞；2)將步驟1)得到的啟動減數(shù)分裂的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含減數(shù)分裂維持因子的細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)，至檢測到單倍體精子細(xì)胞特異基因表達(dá)，經(jīng)分選獲得單倍體。給干細(xì)胞分化技術(shù)治療男性不育應(yīng)用上臨床提供了技術(shù)基礎(chǔ)。

1.一種非治療目的的體外完成細(xì)胞減數(shù)分裂的方法，所述方法包括以下步驟：1）將原始生殖細(xì)胞或原始生殖細(xì)胞樣細(xì)胞（PGCLC）與睪丸細(xì)胞以1：1的數(shù)量比例混合后，在含有減數(shù)分裂啟動因子的細(xì)胞培養(yǎng)基中共培養(yǎng)至形成細(xì)胞集落并且檢測到減數(shù)分裂啟動基因表達(dá)，得到啟動減數(shù)分裂的細(xì)胞；2）將步驟1）所述的啟動減數(shù)分裂的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含有減數(shù)分裂維持因子的細(xì)胞培養(yǎng)基，以維持細(xì)胞的減數(shù)分裂，至檢測到單倍體精子細(xì)胞的特異基因表達(dá)，經(jīng)分選獲得單倍體；其中，所述減數(shù)分裂啟動因子由視黃酸（RA）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（BMP 2）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白4（BMP 4）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白7（BMP 7）和轉(zhuǎn)化生長因子β家族激活素A（Activin A）組成；所述減數(shù)分裂維持因子由睪酮、促卵泡激素（FSH）和牛垂體提取物（BPE）組成；所述原始生殖細(xì)胞、原始生殖細(xì)胞樣細(xì)胞和睪丸細(xì)胞均源自于小鼠。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）所述的減數(shù)分裂啟動基因為Stra8和/或Dmc1。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2）中，所述分選是通過流式細(xì)胞儀實現(xiàn)的。4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述單倍體精子細(xì)胞的特異基因選自基因Tp1、Prm1、Acrosin和Haprin中的一個或多個。5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述單倍體精子細(xì)胞的特異基因為Prm1基因。6. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）所述含有減數(shù)分裂因子的細(xì)胞培養(yǎng)基中，視黃酸（RA）濃度為10^-6 M、骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（BMP 2）的濃度為20ng/ml、骨形態(tài)發(fā)生蛋白4（BMP 4）的濃度為20ng/ml、骨形態(tài)發(fā)生蛋白7（BMP 7）的濃度為20ng/ml；轉(zhuǎn)化生長因子β家族激活素A（Activin A）的濃度為100 ng/ml。7. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2）所述含有減數(shù)分裂維持因子的細(xì)胞培養(yǎng)基中，睪酮的濃度為1μM、促卵泡激素（FSH）的濃度為200 ng/ml，垂體提取物的濃度為50μg/ml。8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1）所述含有減數(shù)分裂因子的細(xì)胞培養(yǎng)基和步驟2）所述含有減數(shù)分裂維持因子的細(xì)胞培養(yǎng)基的基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基為含有10%血清替代物的αMEM培養(yǎng)基。9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述睪丸細(xì)胞為Kit^w/Kit^wv小鼠睪丸細(xì)胞。