本發(fā)明涉及干細(xì)胞領(lǐng)域，公開了臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存保護(hù)液及凍存方法。本發(fā)明所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存保護(hù)液包括10v/v％?20v/v％DMSO、30v/v％?80v/v％臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基、10v/v％?50v/v％胎牛血清。采用本發(fā)明所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存保護(hù)液凍存后復(fù)蘇，細(xì)胞回收率明顯高于常規(guī)凍存液，細(xì)胞增殖能力也優(yōu)于常規(guī)細(xì)胞凍存液。本發(fā)明所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存方法將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞消化離心，加入臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度，加入等體積的所述凍存保護(hù)液后凍存細(xì)胞。本發(fā)明所述凍存方法凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞回收率明顯高于常規(guī)方法，細(xì)胞增殖能力也優(yōu)于常規(guī)的凍存方法。

1.一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存保護(hù)液，由10v/v％-20v/v％DMSO、30v/v％-80v/v％
臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基和10v/v％-50v/v％胎牛血清組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凍存保護(hù)液，所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備方法
為：取P1-P5代的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞酶解消化后傳代，連續(xù)培養(yǎng)24-72h后，收集培養(yǎng)上清，離
心后取上清。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的凍存保護(hù)液，所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備方法
中所述酶解消化具體為向細(xì)胞中加入0.015mL/cm²-0.04mL/cm²的0.05％-0.3％的胰酶和
0.01％-0.04％EDTA消化1min-3min，完全培養(yǎng)基終止酶解。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的凍存保護(hù)液，所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備方法
中所述傳代為酶解消化后的細(xì)胞離心，完全培養(yǎng)基重選后，按80000個(gè)細(xì)胞/cm²-15000個(gè)細(xì)
胞/cm²的傳代密度傳代，細(xì)胞連續(xù)生長24h-72h。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的凍存保護(hù)液，所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備方法
中所述離心為200g-400g離心5min。
6.權(quán)利要求1所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存保護(hù)液的制備方法，按比例將臍帶間充質(zhì)
干細(xì)胞條件培養(yǎng)基與胎牛血清混合，然后加入DMSO，冰水浴中降溫至0℃。
7.一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存方法，將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞消化離心后，加入臍帶間
充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基，調(diào)整細(xì)胞密度至0.1×10⁶個(gè)/mL-10×10⁶個(gè)/mL，加入等體積的權(quán)利
要求1所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存保護(hù)液，混勻后，分裝至凍存管中，-80℃中凍存1天-5
天，轉(zhuǎn)移至液氮中長久保存。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的凍存方法，所述消化為向細(xì)胞中加入0.015mL/cm²-0.04mL/cm²
的0.05％-0.3％的胰酶和0.01％-0.04％EDTA消化1min-3min，用5倍-10倍于消化液的完全
培養(yǎng)基終止酶解。
9.一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存試劑盒，包含權(quán)利要求1所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的凍
存保護(hù)液。