一種通過生物催化生產磷酸肌酸的方法，涉及磷酸肌酸的制備方法的技術領域。本發明提供的方法主要解決磷酸肌酸現有的生物催化生產方法產率低、成本高的技術問題，該方法具體為以肌酸和三磷酸腺苷為底物，在肌酸激酶突變體的催化作用下生產磷酸肌酸，所述肌酸激酶突變體具有如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列，該氨基酸序列的特點是將肌酸激酶親本的氨基酸序列中第33位點的Val突變為Ala。該肌酸激酶突變體的比活性較肌酸激酶親本高出80%，該方法使肌酸轉化為磷酸肌酸的轉化率超過85%，適于大規模工業化生產。

1.一種通過生物催化生產磷酸肌酸的方法，其特征在于：以肌酸和三磷酸腺苷為底物，
在肌酸激酶突變體的催化作用下生產磷酸肌酸，所述肌酸激酶突變體的氨基酸序列如SEQ
ID NO：3所示，所述催化過程還需加入MgCl₂和三聚磷酸鈉。
2.根據權利要求1所述的生物催化生產磷酸肌酸的方法，其特征在于：所述肌酸與所述
三磷酸腺苷的摩爾比為20:1。
3.根據權利要求1所述的生物催化生產磷酸肌酸的方法，其特征在于：所述催化過程是
在pH值為7~8的緩沖溶液中進行。
4.根據權利要求3所述的生物催化生產磷酸肌酸的方法，其特征在于：所述緩沖溶液為
Tris-HCl緩沖溶液。
5.根據權利要求1所述的生物催化生產磷酸肌酸的方法，其特征在于：所述肌酸激酶突
變體為固定在酶固定化載體上的固定化肌酸激酶突變體。
6.根據權利要求5所述的生物催化生產磷酸肌酸的方法，其特征在于：所述酶固定化載
體為環氧型LX-3000、二氧化硅、活性炭、玻璃珠或者大孔型聚N-氨乙基丙烯酰胺-聚乙烯。
7.根據權利要求5所述的生物催化生產磷酸肌酸的方法，其特征在于，所述固定化肌酸
激酶突變體的加入量為0.01-0.5g/ml緩沖溶液。
8.根據權利要求5所述的生物催化生產磷酸肌酸的方法，其特征在于，所述固定化肌酸
激酶突變體的制備方法包括以下步驟：
（1）制備洗酶緩沖液：0.02M Tris-HCl和0.001M EDTA 的混合溶液，pH值為7.0；
（2）制備PB溶液：2.0mol/L磷酸二氫鉀，pH值為7.5；
（3）用步驟（1）制備的洗酶緩沖液將所述肌酸激酶突變體稀釋至5-10mg/ml，并將得到
的酶稀釋液與步驟（2）制備的PB溶液等體積混合，再加入所述酶固定化載體，于搖床中反
應，所述酶固定化載體的加入量為10毫克酶/克載體；
（4）待步驟（3）反應完全后將所得反應液過濾，并用步驟（1）制備的洗酶緩沖液清洗，即
得固定化肌酸激酶突變體。