本發(fā)明公開了一種快速檢測維生素D的試紙條，包括不吸水的支撐板，所述支撐板上依次設(shè)置有樣品墊、結(jié)合墊、層析膜和吸收墊，所述結(jié)合墊上包被有標(biāo)記物標(biāo)記的維生素D與載體蛋白的偶聯(lián)物，所述層析膜為硝酸纖維素膜，層析膜上設(shè)置有質(zhì)控C線和檢測T線，所述檢測T線位于結(jié)合墊和質(zhì)控C線之間，檢測T線上包被有維生素D特異性抗體，質(zhì)控C線上包被有能夠與載體蛋白結(jié)合的特異性抗體。本發(fā)明的試紙條使用方便，操作簡單，檢測速度快，容易普及到基層醫(yī)療單位使用，滿足市場需求，能夠填補國內(nèi)外市場空白，試紙條結(jié)果判斷容易，用符號表示，擺脫了維生素D檢測對設(shè)備、儀器以及人員的特殊要求。

1.一種快速檢測維生素D的試紙條，包括不吸水的支撐板(1)，所
述支撐板(1)上依次設(shè)置有樣品墊(2)、結(jié)合墊(3)、層析膜(4)和
吸收墊(7)，所述結(jié)合墊(3)上包被有標(biāo)記物標(biāo)記的維生素D與載體蛋
白的偶聯(lián)物，所述層析膜(4)為硝酸纖維素膜，層析膜(4)上設(shè)置有質(zhì)
控C線(6)和檢測T線(5)，所述檢測T線(5)位于結(jié)合墊(3)和
質(zhì)控C線(6)之間，檢測T線(5)上包被有維生素D特異性抗體，質(zhì)
控C線(6)上包被有能夠與載體蛋白結(jié)合的特異性抗體；所述維生素D
特異性抗體為鼠抗維生素D單克隆抗體，維生素D特異性抗體的包被量
為2μL，包被濃度為0.25mg/mL～5mg/mL；所述能夠與載體蛋白結(jié)合的特
異性抗體的包被量為2μL，包被濃度為0.1mg/mL～1.0mg/mL，其特征在
于，所述標(biāo)記物標(biāo)記的維生素D與載體蛋白的偶聯(lián)物的制備方法包括以下
步驟：
步驟一、將1mg～10mg維生素D溶解于100μL有機溶劑中，然后在
攪拌條件下向10mL濃度為0.1mg/mL～5mg/mL的載體蛋白溶液中逐滴加
入溶解后的維生素D，再逐滴加入體積百分比濃度為50％的戊二醛水溶液
至溶液中戊二醛的體積百分比濃度為1％～3％，攪拌5min～20min后移至
4℃下攪拌反應(yīng)16h～18h，反應(yīng)后的反應(yīng)液用PBS緩沖溶液在4℃下透析
8h，透析過程中換液2～3次，透析物離心后取上清液，最后將上清液用
0.45μm濾膜過濾，得到維生素D與載體蛋白的偶聯(lián)物，-20℃保存?zhèn)溆茫?br/>步驟二、向標(biāo)記物溶液中加入步驟一中所述維生素D與載體蛋白的偶
聯(lián)物至溶液中維生素D的終濃度為10μg/mL～1000μg/mL，攪拌5min后
加入BSA溶液至BSA的質(zhì)量體積百分濃度為0.1％～1％，在4℃下避光攪
拌反應(yīng)30min后加入聚乙二醇溶液至聚乙二醇的質(zhì)量體積百分濃度為
0.1％～1％，繼續(xù)反應(yīng)5min后離心，棄去上清，將沉淀復(fù)溶后得到標(biāo)記物
標(biāo)記的維生素D與載體蛋白的偶聯(lián)物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測維生素D的試紙條，其特征
在于，所述標(biāo)記物為膠體金顆粒。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測維生素D的試紙條，其特征
在于，所述載體蛋白為牛血清白蛋白，能夠與載體蛋白結(jié)合的特異性抗體
為BSA免疫球蛋白。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測維生素D的試紙條，其特征
在于，所述載體蛋白為雞卵清白蛋白，能夠與載體蛋白結(jié)合的特異性抗體
為兔抗雞卵清白蛋白。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測維生素D的試紙條，其特征
在于，所述維生素D為25-羥基維生素D3或25-羥基維生素D2。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測維生素D的試紙條，其特征
在于，所述檢測T線(5)和質(zhì)控C線(6)之間的距離為1cm。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測維生素D的試紙條，其特征
在于，步驟一中所述有機溶劑為正己烷、乙腈、二甲基亞砜或1,4-二氧六
環(huán)。