本發(fā)明涉及一種長(zhǎng)裙竹蓀抑菌活性單體的分離純化方法，本發(fā)明的長(zhǎng)裙竹蓀抑菌活性單體的分離純化方法，包括長(zhǎng)裙竹蓀子實(shí)體預(yù)處理、浸提、萃取、硅膠柱層析、反相硅膠柱層析。長(zhǎng)裙竹蓀不僅營(yíng)養(yǎng)豐富，含有多種氨基酸、維生素和礦物質(zhì)，還具有健脾益胃、降血脂、降血壓，抗腫瘤、抗凝血、消腫止痛、抗艾滋病、刺激免疫、抗輻射以及較強(qiáng)的抑菌防腐作用，竹蓀與肉共煮，肉不易變質(zhì)，是一種天然的食品防腐劑。從長(zhǎng)裙竹蓀中分離出具有抑菌活性的單體，它可以開(kāi)發(fā)成一種天然防腐劑應(yīng)用于食品，具有廣闊的應(yīng)用前景。

1.一種長(zhǎng)裙竹蓀抑菌活性單體的分離純化方法，其特征在于：包括長(zhǎng)裙竹蓀子實(shí)體預(yù)
處理、浸提、萃取、硅膠柱層析、反相硅膠柱層析；
具體操作步驟如下：
（1）長(zhǎng)裙竹蓀子實(shí)體預(yù)處理：竹蓀子實(shí)體干品于60℃烘箱中烘烤3h，然后用植物粉碎機(jī)
粉碎，過(guò)80目篩，得到子實(shí)體粉末；
（2）浸提：稱取長(zhǎng)裙竹蓀子實(shí)體粉末，按液固重量份數(shù)比26~24：1加入無(wú)水乙醇，72℃下
水浴1.5h后抽濾得濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器100rpm、60℃下將液體旋干，所得固形物為長(zhǎng)裙竹蓀
粗提物，備用；
（3）萃取：長(zhǎng)裙竹蓀粗提物溶于水，依次用石油醚、乙酸乙酯進(jìn)行萃取，每層萃取3-5次
即可；取乙酸乙酯層萃取物置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上60℃下蒸干溶劑，得乙酸乙酯層固形物，備
用；其中粗提物和水的重量份數(shù)比為1：18~20，石油醚與乙酸乙酯重量份數(shù)比為1：1~2；
（4）硅膠柱層析：
1）第一次硅膠柱層析：①裝柱：準(zhǔn)確稱取適量200-300目硅膠于燒杯中，加入石油醚攪
拌成漿，在色譜柱底端塞一團(tuán)棉花，往柱中加入5mL石油醚，將漿液緩緩傾入柱中，使硅膠自
然沉降，同時(shí)用玻璃棒輕輕敲擊色譜柱以排除氣泡，將層析柱下端開(kāi)關(guān)打開(kāi)，使流動(dòng)相自然
流下，直至液面在柱面上方3cm，用700mL第一個(gè)流動(dòng)相平衡；②上樣：將試樣溶于少量甲醇
中，用4倍于試樣的硅膠研磨混勻，揮干溶劑，使其松散，經(jīng)漏斗緩緩加入色譜柱上方，然后
用少量流動(dòng)相淋洗柱壁，使硅膠柱表面平整；③淋洗：用石油醚：乙酸乙酯=6.5-7：2.8-3、
0.8-1：0.8-1依次分別淋洗5個(gè)柱體積，兩種比例淋洗液各自用量為1500 mL，用錐形瓶收集
洗脫液，每瓶收集300mL，共得到10個(gè)片段，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上50℃蒸干各個(gè)片段的液體，依
次編號(hào)為D₁1-D₁10號(hào)，合并D₁2-D₁8片段的組分，備用；
2）第二次硅膠柱層析：①裝柱：同1）；②上樣：同1）；③淋洗：用石油醚﹕乙酸乙酯=6.5-
7：2.8-3、5.6-6：3.6-4依次分別淋洗3個(gè)柱體積，兩種比例淋洗液各自用量為750 mL用錐形
瓶收集洗脫液, 每瓶收集250mL，共得到6個(gè)片段，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上50℃蒸干各個(gè)片段的
液體，依次編號(hào)為D₂1-D₂6號(hào)，合并D₂3-D₂4片段組分，備用；
3）第三次硅膠柱層析：①裝柱：同1）；②上樣：同1）；③淋洗：用石油醚﹕乙酸乙酯=7.5-
8：1.8-2、7-7.5：3-3.5依次分別淋洗3個(gè)柱體積，兩種比例淋洗液各自用量為750 mL，用錐
形瓶收集洗脫液，每瓶收集250mL，共得到6個(gè)片段，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上50℃蒸干各個(gè)片段的
液體，依次編號(hào)為D₃1-D₃6號(hào)，合并D₃4-D₃5片段組分，備用；
（5）反相硅膠柱層析：用10g硅膠裝柱，用300mL甲醇洗柱，300mL超純水平衡，然后將上
述合并的D₃4-D₃5片段組分溶解于2mL甲醇中，加入層析柱上方，控制流速為10mL/min，用
300mL超純水淋洗，用錐形瓶收集，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上50℃蒸干液體得到白色結(jié)晶體即為具有
抑菌活性的單體。