1.一種檢測方法，所述方法包括以下步驟：
(1)在基于Taqman探針實時熒光PCR的基本反應體系中，另外加入一種或多種待測核酸
樣本，以及與該待測核酸樣本對應的一個或多個融解曲線探針；
(2)同時設定Taqman探針實時熒光PCR反應程序以及探針法融解曲線反應程序，所述融
解曲線反應程序的起始溫度與所述融解曲線探針的退火溫度相比，低3-20℃；
(3)反應程序結束后，對得到的基于Taqman探針實時熒光PCR技術的擴增曲線和基于探
針法融解曲線技術的融解曲線進行分析；
其中，所述融解曲線探針與核酸結合的退火溫度比同一反應體系中Taqman實時熒光探
針與核酸結合的退火溫度低3-20℃；
并且，所述融解曲線探針不能被具有5’-3’外切酶活性的DNA聚合酶水解，所述融解曲
線探針的5’端的五碳糖、堿基或者報告熒光基團被基團修飾，所述基團為氨基、甲基、硫基
或生物素；
在步驟(2)中，所述Taqman探針實時熒光PCR反應程序中的退火溫度低于所述Taqman實
時熒光探針的退火溫度，并且高于所述融解曲線探針的退火溫度。
2.權利要求1的檢測方法，其中，所述融解曲線探針與核酸結合的退火溫度比同一反應
體系中Taqman實時熒光PCR中探針與核酸結合的退火溫度低5-15℃。
3.權利要求1的檢測方法，其中，所述融解曲線反應程序的起始溫度與所述融解曲線探
針的退火溫度相比低5-15℃。
4.權利要求1的檢測方法，其中，所述融解曲線探針的長度為10-40bp。
5.權利要求4的檢測方法，其中，所述融解曲線探針的長度為16-21bp。
6.權利要求1的檢測方法，其中步驟(1)中所述的另外加入的核酸樣本數或融解曲線探
針的個數最多與同一反應體系中基于Taqman探針實時熒光PCR技術可檢測的樣本或探針數
相同。
7.權利要求1的檢測方法，其中步驟(1)中的融解曲線探針還連接有報告熒光基團，當
該融解曲線探針的數目為多個時，這些融解曲線探針之間的報告熒光基團不同。
8.權利要求1的檢測方法，其中步驟(1)中還加入與另外加入的核酸樣本相適應的擴增
引物。
9.權利要求1的檢測方法，其中所述的融解反應程序為，從比所述融解曲線探針與核酸
的退火溫度低5-15℃開始，逐漸升溫至90-99℃，每秒鐘升溫0.1℃左右。
10.權利要求9的檢測方法，其中所述的融解反應程序為，從40℃開始，逐漸升溫至90-
99℃，每秒鐘升溫0.1℃左右。
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