本發明涉及基因工程領域。具體涉及Exendin-4目的基因的改造和表達載體的構建。根據Gene Bank中登錄的Exendin-4的氨基酸序列，結合大腸桿菌的密碼子偏嗜性，對原有基因70％的密碼子進行改造，使其能在大腸桿菌中高效表達；添加合適的酶切位點和腸激酶位點，構建合適的表達載體，將重組表達載體轉化入不同的大腸桿菌工程菌，篩選高效表達Exendin-4的菌株。

1.一種Exendin-4高產工程菌株的構建方法，其特征在于它是按以下步驟進行的：(1)Exendin-4基因的改造：依據大腸桿菌密碼子嗜性及Genebank中登錄編號為AAB22006的Exendin-4多肽的序列，設計編碼Exendin-4的核苷酸序列，改造為如SEQ?ID?No.1所示的Exendin-4基因；人工合成SEQ?ID?No.1所示的Exendin-4基因，采用PCR方法，以5′GGTACCGACGACGACGACAAGC?3′為正向引物，以5′CCATGGTTATCAAGATGGTGGCG?3′為反向引物，在SEQ?ID?No.I所示的Exendin-4基因5′端加上限制性內切酶Kpn?I識別位點；在Kpn?I識別位點后添加編碼腸激酶識別位點DDDDK的核酸序列GACGACGACGACAAG，使腸激酶識別位點的核酸序列與Exendin-4基因緊密相連；在SEQ?ID?No.I所示的Exendin-4基因3′端添加兩個相連的終止密碼子TGATAA和限制性內切酶NcoI識別位點CCATGG；(2)克隆載體pMD19-T-Exendin-4的構建：利用PCR擴增的步驟(1)所述的改造后的Exendin-4基因，純化后與pMD19-T載體連接，構建克隆載體pMD19-T-Exendin-4；(3)高效表達載體pET-32a(+)-Exendin-4的構建：用限制性內切酶KpnI和Nco?I雙酶切pMD19-T-Exendin-4質粒，回收目的片斷；用限制性內切酶KpnI和Nco?I消化表達載體質粒pET-32a(+)，回收載體pET-32a(+)大片段，將二者連接即重組Exendin-4表達載體pET-32a(+)-Exendin-4；將表達載體pET-32a(+)-Exendin-4轉化入大腸桿菌工程菌BL21(DE3)pLYS中，得到Exendin-4高產工程菌株BL21(DE3)pLYS-pET-32a(+)-Exendin-4。