一種新城疫病毒HN基因和F基因重組乳酸菌的構建，屬于生物技術領域，其特征是：1新城疫病毒F48E9株HN基因和F基因的克隆與序列分析，2新城疫病毒重組表達載體pW425et-HN和pW425et-F的構建及在大腸桿菌中的表達，3重組質粒pW425et-HN和pW425et-F在乳酸菌中的表達。有益效果是：外源基因F和HN在乳酸菌中獲得了表達，并且具用反應原性，而且重組基因工程乳酸菌可以增強機體對新城疫病毒的粘膜免疫。利用這一平臺也可將其它引起禽類高度接觸性傳染病的病原微生物的保護性抗原基因轉入益生的乳酸菌中，使其表達。

1.一種新城疫病毒HN基因和F基因重組乳酸菌，它是由下述方法制成的：a、新城疫病毒F48E9株HN基因和F基因的克隆與序列分析根據Genebank中NDV?F48E9株的HN基因序列和F基因序列，分別設計出帶有SacI和KpnI酶切位點的一對引物，以NDV?F48E9株的總RNA為模板，應用RT-PCR方法擴增出HN基因和F基因，并將其克隆至pMD-18T載體中，進行核苷酸序列分析；所述的引物：PHN1：5′TAT?GAGCTC?ATG?GAC?CGT?GT?3′PHN2：5′GCC?GGTACC?TTAAAT?CCC?ATC?3′；PF1：5’TACGAGCTCATGGGCCCCAAATCTTCTACC?3’PF2：5’TGTGGTACCTCAGATTCTTGTAGTGGCCCT?3’；b、新城疫病毒重組表達載體pW425et-HN和pW425et-F的構建及在大腸桿菌中的表達SacI和KpnI雙酶切重組質粒pMD18-T-HN和pMD18-T-F，將純化的HN基因和F基因亞克隆至雙標記表達載體pW425et中，構建出在大腸桿菌與乳酸菌之間穿梭表達的原核表達重組質粒pW425et-HN和pW425et-F；c、重質粒pW425et-HN和pW425et-F在乳酸菌中的表達應用電轉化技術將已構建的新城疫病毒重組質粒pW425et-HN和pW425et-F分別轉化至嗜酸乳桿菌感受態中;對篩選到的陽性克隆，采用SDS-PAGE進行鑒定，可見66kD的融合蛋白和59kD的融合蛋白；所述的嗜酸乳桿菌感受態是將40日齡的健康雞，以斷頸方式宰殺，體表消毒；在無菌條件下取腺胃內容物0.1g，以滅菌的生理鹽水將樣品稀釋成10^-1、10^-3、10^-6、10^-9濃度；選擇不同的稀釋度，用滅菌的200μl?tip頭取100μl稀釋液接種于各自的選擇培養基MRS中，用曲玻棒推勻，以利于單個菌落的分離篩選；在厭氧罐中37℃培養24-72h；根據嗜酸乳酸桿菌在MRS選擇培養基上菌落的形態、大小、革蘭氏染色特點、菌體排列和生化特性的特點，可以篩選出嗜酸乳酸桿菌；將乳酸菌單個菌落培養至OD₆₀₀值為0.3-0.4時，以2％的接種量轉移到含有1％甘氨酸的MRS培養液中，摸索乳酸菌不同生長時期對電轉化效率的影響；將生長到最佳時期的乳酸菌，8000r/min離心5min收集菌體；用冰冷無菌的電擊轉化緩沖液PEB-2懸浮洗2-3次后，懸浮于電擊緩沖液，冰浴5min。?