本發明公開一種高水平表達產生枯草芽孢桿菌精氨酸酶的大腸桿菌基因工程菌：TOP10/PBAD/Thio-TOPO-Arg-Bsub，和其構建方法。構建的基因工程菌是攜帶有一種重組質粒的大腸桿菌E.coli TOP10菌株，所述的重組質粒是攜帶有枯草芽孢桿菌(Bacillus Subtilis)精氨酸酶基因(arg-Bsub)完整序列的pBAD/Thio-TOPO-arg-Bsub。該菌株可把98％的L-精氨酸轉化成L-鳥氨酸。

1.一種大腸桿菌(Escherichia?coli)TOP10/PBAD/Thio-TOPO-Arg-Bsub?CCTCC
NO.M2010358。
2.權利要求1所述的大腸桿菌TOP10/PBAD/Thio-TOPO-Arg-Bsub的構建方法，
包括以下步驟：
第一步：采用PCR技術把保藏號CCTCC?No.93009的枯草芽孢桿菌的精氨酸酶基
因擴增出來，擴增的雙鏈DNA的兩條鏈的3’-端都具有一個突出的脫氧腺苷酸A，擴
增的DNA片斷記作argBsub，把此DNA片斷和質粒pBAD/Thio-TOPO進行TA連接，
得到重組質粒pBAD/Thio-TOPO-arg-Bsub，
第二步：用重組質粒pBAD/Thio-TOPO-arg-Bsub轉化大腸桿菌宿主菌E.coli
TOP10，得到高水平表達產生枯草芽孢桿菌精氨酸酶的基因工程菌株：
TOP10/PBAD/Thio-TOPO-Arg-Bsub。
3.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于：構建重組質粒pBAD/Thio-TOPO-
arg-Bsub，其擴增基因時使用的兩個引物的序列如下：
引物P1：5′-GAAATGGATAAAACGATTTCGGTTAT-3′，共26bp，
引物P2：5′-GGTCAGCAGCTTCTTCCCTAACA-3′，共23bp。