1.能夠使糖蛋白巖藻糖基化的細胞,其中所述細胞包含修飾的
GDP-4-酮-6-脫氧-甘露糖-3,5-表異構酶-4-還原酶(FX)基因,該基因
編碼SEQ?ID?NO:1所示的FX蛋白,所述SEQ?ID?NO:1的序列具有氨基
酸置換L289S;并且其中當所述細胞在不存在外部巖藻糖源的情況下在
37℃的溫度生長時,不超過10%的糖蛋白被巖藻糖基化。
2.權利要求1的細胞,其中所述氨基酸置換是L289S和下列一項:
N79S,N90K,P136L或G211R。
3.權利要求1的細胞,其中所述細胞是中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。
4.權利要求1的方法,其中所述FX蛋白是倉鼠、小鼠、大鼠、猴
子或人的FX蛋白。
5.權利要求1的細胞,其中所述細胞表達包含免疫球蛋白CH2區
和免疫球蛋白CH3區的糖蛋白。
6.權利要求5的細胞,其中所述糖蛋白是抗體。
7.權利要求5的細胞,其中當所述細胞在不存在外部巖藻糖源的
情況下在37℃的溫度生長時,不超過6%的糖蛋白被巖藻糖基化。
8.權利要求7的細胞,其中當所述細胞在不存在外部巖藻糖源的
情況下在37℃的溫度生長時,不超過2%的糖蛋白被巖藻糖基化。
9.權利要求1的細胞,其中當所述細胞在不存在外部巖藻糖源的
情況下在34℃的溫度生長時,所述細胞使至少70%的糖蛋白巖藻糖基化。
10.權利要求1的細胞,其中當所述細胞在不存在外部巖藻糖源的
情況下在34℃的溫度生長時,所述細胞使至少90%的糖蛋白巖藻糖基化。
11.權利要求1的細胞,其中當所述細胞在存在外部巖藻糖源的情
況下在37℃的溫度生長時,所述細胞使至少70%的糖蛋白巖藻糖基化。
12.權利要求1的細胞,其中當所述細胞在存在外部巖藻糖源的情
況下在37℃的溫度生長時,所述細胞使至少90%的糖蛋白巖藻糖基化。
13.編碼FX蛋白的分離的核苷酸序列,其中所述FX蛋白如SEQ?ID?
NO:1所示,所述SEQ?ID?NO:1的序列具有氨基酸置換L289S。
14.權利要求13的分離的核苷酸序列,其中所述氨基酸置換是
L289S和下列一項:N79S,N90K,P136L或G211R。
15.權利要求1的細胞,還包括編碼免疫球蛋白基因的核苷酸序列。
16.制備具有減少的巖藻糖基化的糖蛋白的方法,包括:
在37℃的溫度,在不存在外部巖藻糖源的情況下,培養哺乳動物細
胞,所述細胞包含FX基因,所述FX基因編碼SEQ?ID?NO:1所示的FX
蛋白,所述SEQ?ID?NO:1的序列具有氨基酸置換L289S,其中所述細胞
表達包含免疫球蛋白CH2區和免疫球蛋白CH3區的糖蛋白;和
從培養物中分離糖蛋白。
17.權利要求16的方法,其中所述氨基酸置換是L289S和下列一
項:N79S,N90K,P136L或G211R。
18.權利要求16的方法,其中所述糖蛋白是抗體。
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