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目的基因轉化甜櫻桃的方法及其在甜櫻桃原生質體瞬時轉化中的應用

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-27
  • 技術成熟度:可以量產
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201610330575.9 
  • 技術(專利)名稱 目的基因轉化甜櫻桃的方法及其在甜櫻桃原生質體瞬時轉化中的應用 
  • 項目單位 中國農業大學
  • 發明人 李天紅,姚立萍,郭蕭,趙迪,王彥濤 
  • 行業類別 其他領域
  • 技術成熟度 可以量產
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 蔣美琴
  • 發布時間 2022-01-27  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了目的基因轉化甜櫻桃的方法及其在甜櫻桃原生質體瞬時轉化中的應用。本發明公開的甜櫻桃轉化方法包括:將甜櫻桃果肉愈傷組織進行懸浮繼代培養,得到懸浮細胞;將懸浮細胞用CPW13M進行處理,得到CPW13M處理的懸浮細胞,CPW13M為向細胞?原生質體清洗液中加入甘露醇得到的甘露醇質量百分比濃度為11%?15%的溶液;用纖維素酶和果膠酶酶解CPW13M處理的懸浮細胞得到甜櫻桃原生質體;以甜櫻桃原生質體為受體進行甜櫻桃轉化。實驗證明,本發明的甜櫻桃轉化方法可以將目的基因在甜櫻桃原生質體中進行瞬時表達,可以用來進行目的基因的功能驗證及蛋白質和細胞器的定位,還可用來檢測蛋白質互作及細胞代謝。
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  • 02

    說明書

    1.甜櫻桃轉化方法,包括以甜櫻桃原生質體為受體進行甜櫻桃轉化;所述甜櫻桃原生質體為利用甜櫻桃果肉制備的原生質體;利用甜櫻桃果肉制備原生質體的方法包括:A1)將甜櫻桃果肉愈傷組織進行懸浮繼代培養,得到懸浮細胞;A2)用纖維素酶和果膠酶酶解所述懸浮細胞得到所述甜櫻桃原生質體;所述甜櫻桃果肉愈傷組織的制備方法包括:將甜櫻桃果肉在誘導培養基上進行誘導培養得到甜櫻桃果肉愈傷組織;所述誘導培養基為向MS培養基中加入BA、2,4-D和蔗糖得到的固體培養基;所述誘導培養基中BA、2,4-D和蔗糖的濃度分別為2 mg/L、1 mg/L和3%;所述甜櫻桃果肉愈傷組織的制備方法還包括將所述甜櫻桃果肉愈傷組織在繼代培養基上進行繼代培養;所述繼代培養基為向MS培養基中加入BA、2,4-D和蔗糖得到的固體培養基;所述繼代培養基中BA、NAA和蔗糖的濃度分別為3 mg/L、1.5 mg/L和3%所述甜櫻桃果肉為10-40 DAFB的甜櫻桃果實的果肉;所述將甜櫻桃果肉愈傷組織進行懸浮繼代培養包括:將所述甜櫻桃果肉愈傷組織在懸浮系繼代培養基中進行懸浮繼代培養,得到懸浮細胞;所述懸浮系繼代培養基為向MS培養基中加入BA、NAA、維生素C和蔗糖得到的培養基;所述懸浮系繼代培養基中所述BA、所述NAA、所述維生素C和所述蔗糖的濃度分別為1.0 mg/L、0.3 mg/L、3 mg/L和質量百分比濃度3%,pH為5.85。2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于:所述用纖維素酶和果膠酶酶解所述懸浮細胞前還包括將所述懸浮細胞用CPW13M進行處理;所述CPW13M為向細胞-原生質體清洗液中加入甘露醇得到的甘露醇的質量百分比濃度為11%-15%的溶液。3.根據權利要求2所述的方法,其特征在于:用所述CPW13M處理所述懸浮細胞的時間為0.5-2 h。4.根據權利要求3中任一所述的方法,其特征在于:所述A2)包括A21)和A22):A21)用含有所述纖維素酶和所述果膠酶的酶液浸泡所述懸浮細胞,得到酶-原生質體混合液;A22)將所述酶-原生質體混合液加至CPW25S上,得到下層為CPW25S上層為酶-原生質體混合液的分層液體1;將所述分層液體1進行離心,使原生質體位于所述分層液體1的界面處,分離原生質體,得到所述甜櫻桃原生質體;所述CPW25S為向所述細胞-原生質體清洗液中加入蔗糖得到的溶液;所述CPW25S中蔗糖質量百分比濃度為23%-27%。5.下述P1或P2的方法:P1、權利要求1-4中任一所述利用甜櫻桃果肉制備原生質體的方法;P2、權利要求1-4中任一所述甜櫻桃果肉愈傷組織的制備方法。6.下述M1或M2的產品:M1、用于制備甜櫻桃原生質體的成套試劑,為權利要求4中所述CPW13M、所述CPW25S、所述細胞-原生質體清洗液、所述纖維素酶、所述果膠酶、所述誘導培養基和所述繼代培養基;M2、用于誘導甜櫻桃果肉愈傷組織的成套試劑,為權利要求1中所述誘導培養基和所述繼代培養基。7.下述任一應用:X1、權利要求1-4中任一所述甜櫻桃轉化方法在甜櫻桃中瞬時表達目的基因中的應用;X2、權利要求1-4中任一所述利用甜櫻桃果肉制備原生質體的方法在甜櫻桃中瞬時表達目的基因中的應用;X3、權利要求1-4中任一所述甜櫻桃果肉愈傷組織的制備方法在甜櫻桃中瞬時表達目的基因中的應用;X4、權利要求6所述產品在甜櫻桃中瞬時表達目的基因中的應用;X5、權利要求1-4中任一所述甜櫻桃轉化方法在植物基因功能驗證中的應用;X6、權利要求1-4中任一所述利用甜櫻桃果肉制備原生質體的方法在植物基因功能驗證中的應用;X7、權利要求1-4中任一所述甜櫻桃果肉愈傷組織的制備方法在植物基因功能驗證中的應用;X8、權利要求6所述產品在植物基因功能驗證中的應用;X9、權利要求1-4中任一所述甜櫻桃果肉愈傷組織的制備方法在制備甜櫻桃原生質體的中的應用;X10、權利要求1-4中任一所述甜櫻桃果肉愈傷組織的制備方法在甜櫻桃轉化中的應用;X11、權利要求1-4中任一所述利用甜櫻桃果肉制備原生質體的方法在制備甜櫻桃原生質體的中的應用。
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