本發(fā)明提供了一種基于氧消耗速率的維生素B12發(fā)酵生產(chǎn)控制工藝。具體地，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)維生素B12的發(fā)酵方法，包括步驟：(a)培養(yǎng)維生素B12的生產(chǎn)菌株；(b)在發(fā)酵過程中檢測(cè)發(fā)酵體系的尾氣中二氧化碳的濃度，通過調(diào)控?cái)嚢杷俣群?或進(jìn)氣，控制尾氣中二氧化碳的濃度，從而維持高水平的維生素B12的產(chǎn)物合成速率；和(c)從發(fā)酵液中分離純化出維生素B12。本發(fā)明方法可明顯提高維生素B12產(chǎn)率，降低底物消耗，同時(shí)降低單位能耗，可大幅降低生產(chǎn)成本，具有工藝控制簡(jiǎn)單、可操作性強(qiáng)、節(jié)約能源等特點(diǎn)。

1.一種生產(chǎn)維生素B12的發(fā)酵方法，其特征在于，它包括步驟：
(a)在適合發(fā)酵的條件下，培養(yǎng)維生素B12的生產(chǎn)菌株；該維生素B12的生
產(chǎn)菌株是脫氮假單胞桿菌(Pseudomonasdenitrificans)；
(b)在菌體生長(zhǎng)進(jìn)入穩(wěn)定期時(shí)，檢測(cè)發(fā)酵體系的尾氣中二氧化碳的濃度，
通過調(diào)控?cái)嚢杷俣取⒐迚汉?或進(jìn)氣，使得尾氣中二氧化碳的濃度處于6-
10％(v/v)范圍內(nèi)，從而維持高水平的維生素B12的產(chǎn)物合成速率，并產(chǎn)生維生
素B12；所述的高水平的維生素B12的產(chǎn)物合成速率是≥2.0mg·L^-1·h^-1；和
(c)從發(fā)酵液中分離純化出維生素B12。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(b)中，所述的調(diào)控是間
歇式調(diào)控、或連續(xù)調(diào)控。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(b)中，通過調(diào)控使得發(fā)
酵體系的尾氣中二氧化碳的濃度處于7-9.5％(v/v)范圍內(nèi)。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(b)中，根據(jù)以下公式計(jì)
算尾氣中的二氧化碳濃度并進(jìn)行調(diào)控：
Eco₂＝RQ×F^-0.6358×R^0.2250×P^-0.0716×V×22.57+0.03
式中，ECO₂為尾氣中二氧化碳體積濃度，％；RQ為呼吸熵，無量綱；F為
進(jìn)氣流量，m³/h；R為攪拌轉(zhuǎn)速,rpm；P為罐壓力，MP；V為發(fā)酵液體積，m³。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(b)中還包括控制發(fā)酵體
系的氧消耗速率，使得氧消耗速率為12-25mmol·L^-1·h^-1。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的發(fā)酵體系的體積為5L至
200立方米。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述的發(fā)酵體系的體積為50L
至150立方米。
8.一種維生素B12發(fā)酵生產(chǎn)方法，其特征在于，在發(fā)酵過程中，當(dāng)生產(chǎn)維
生素B12的工程菌菌體生長(zhǎng)進(jìn)入生長(zhǎng)穩(wěn)定期時(shí)或之后，通過調(diào)控?cái)嚢杷俣群?或
進(jìn)氣，控制發(fā)酵體系的尾氣中二氧化碳的濃度，使得尾氣中二氧化碳的濃度處
于6-10％％(v/v)范圍內(nèi)，從而維持維生素B12的生產(chǎn)速率大于或等于2.0mg·L^-
1·h^-1；其中，所述的生產(chǎn)維生素B12的工程菌是脫氮假單胞桿菌(Pseudomonas
denitrificans)。