1.一種重組粒細胞集落刺激因子多肽的純化方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）選用pPIC9K-G-CSF15-75-GS115工程菌做菌株進行發酵培養；
2）發酵培養液12000rpm，離心10min，上清液過0.45μm濾膜；
3）對過濾上清進行疏水層析純化處理，得到疏水層析產物；
4）對疏水層析產物陰離子交換，得到陰離子交換液；
5）對陰離子交換液進行凝膠過濾，得到重組人粒細胞集落刺激因子多肽；
其中，步驟3）疏水層析柱填料為Phenyl Sepharose 6 Fast Flow high sub，疏水層析
平衡緩沖液為10 mmol/L HAc-NaAc，pH 5.0，加固體NaCl 調節電導率 50ms/cm；洗脫緩沖
液為10 mmol/L Tris-HCl，pH 8.5；
步驟4）陰離子交換層析柱其柱填料為聚苯乙烯-二乙烯苯SKI-10，陰離子層析平衡緩
沖液為10mmol/L Tris-HCl，pH 8.5；洗脫緩沖液為100 mmol/L HAc-NaAc，pH5.0；
步驟5）凝膠過濾柱填料為Sephacryl s-100HR，凝膠層析洗脫緩沖液為10 mmol/L
HAc-NaAc，pH 5.0。
2.如權利要求1所述的重組粒細胞集落刺激因子多肽的純化方法，其特征在于，所述的
工程菌為保藏號為CGMCC NO:10713的巴斯德畢赤酵母菌。
3.如權利要求1所述的重組粒細胞集落刺激因子多肽的純化方法，其特征在于步驟3）
具體實施步驟為：
樣品預處理：接收步驟2）所得過濾后的發酵上清液，用乙酸調pH至5.0，加固體NaCl 調
節電導率至50ms/cm；
平衡：設置檢測波長280nm，用5-10倍柱體積平衡緩沖液平衡，平衡時泵流速為20.0
ml/min，待UV值穩定后，紫外校零；
上樣：上樣時泵流速為8.0-18.5 ml/min，上樣結束后用5個柱床體積平衡緩沖液復平
衡；
洗脫：上樣完畢后，用洗脫緩沖液洗脫，調節泵流速為5.5-10.2ml/min，根據UV值的變
化收集主峰。
4.如權利要求1所述的重組粒細胞集落刺激因子多肽的純化方法，其特征在于，所述的
步驟4）具體實施步驟為：
樣品預處理：接收步驟3）所得疏水層析后蛋白溶液，用氫氧化鈉調pH至8.5，加水稀釋
至電導率為1-4ms/cm；
平衡：設置檢測波長280nm，用5-10倍柱體積平衡緩沖液平衡，平衡時泵流速為20.0
ml/min，待UV值穩定后，紫外校零；
上樣：將疏水層析峰直接上樣，上樣時泵流速為8.5-19.8 ml/min ，上樣結束后用5個
柱床體積平衡緩沖液復平衡；
洗脫：上樣完畢后，用洗脫緩沖液洗脫，調節泵流速為5.5-10.2ml/min，根據UV值的變
化收集目的峰。
5.如權利要求1所述的重組粒細胞集落刺激因子多肽的純化方法，其特征在于，所述的
步驟5）具體操作步驟為：
平衡：設置檢測波長280nm，用5-10個柱體積HAc-NaAc緩沖液平衡，平衡時泵流速為
0.3-1.17 ml/min，待UV值穩定后，紫外校零；
上樣：將陰離子交換純化后目的蛋白直接上樣, 上樣時泵流速為0.3-1.17ml/min，樣
品上樣量為柱體積的0.5%-4%；
洗脫：上樣完畢后，用HAc-NaAc緩沖液洗脫，調節泵流速為0.3-1.17 ml/min，根據UV值
的變化收集目的蛋白溶液。
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