本發明提供一種用于將胚胎干細胞誘導為心肌細胞的培養基，該培養基的化學成分明確，所述培養基為化學成分明確的液體培養基，所述培養基包括基礎培養基RPMI?1640；所述培養基還包括1～3mg/L的L?肉毒堿、0.5～2mg/L的乙醇胺、10～20mg/L的腐胺、0.01～0.02mg/L的亞硒酸鈉、0.5～2mg/L的亞油酸、3～6mg/L的轉鐵蛋白、50?200mg/L的維生素C和/或維生素C磷酸鎂鹽、50?500μM的N乙酰半胱氨酸。本發明還提供了本發明所述的培養基的制備方法和使用方法。本發明中培養基配方的各組分明確，成本低廉，非常有利于大規模的心肌細胞制備和臨床應用。

1.一種用于將胚胎干細胞誘導為心肌細胞的培養基的組合，其中所述培養基的組合包含培養基I、II、III和IV；所述培養基I、II、III和IV均為化學成分明確的液體培養基，均包括基礎培養基RPMI-1640；其中，所述培養基I、II、III和IV均包括1～3mg/L的L-肉毒堿、0.5～2mg/L的乙醇胺、10～20mg/L的腐胺、0.01～0.02mg/L的亞硒酸鈉、0.5～2mg/L的亞油酸、3～6mg/L的轉鐵蛋白、50-200mg/L的維生素C和/或維生素C磷酸鎂鹽、以及50-500μM的N乙酰半胱氨酸；所述培養基II還包括濃度為2～6mg/L的胰島素；所述培養基III還包括濃度為2-8μM的誘導小分子CHIR99021；和所述培養基IV還包括濃度為2-8μM的Wnt受體抑制劑IWR1或濃度為1-5μM的Wnt抑制劑wnt-c59；其中，所述基礎培養基的滲透壓值為295-305。2.根據權利要求1所述的培養基的組合，其特征在于，所述培養基I、II、III和IV均包括2mg/L的L-肉毒堿、1mg/L的乙醇胺、16mg/L的腐胺、0.016mg/L的亞硒酸鈉、1mg/L的亞油酸、5mg/L的轉鐵蛋白、100mg/L的維生素C和/或維生素C磷酸鎂鹽、以及200μM的N乙酰半胱氨酸。3.根據權利要求1所述的培養基的組合，其特征在于，所述基礎培養基的滲透壓值為300。4.根據權利要求1所述的培養基的組合，其特征在于，所述胰島素在培養基II中的濃度為4mg/L。5.根據權利要求1所述的培養基的組合，其特征在于，所述CHIR99021在培養基III中的濃度為4μM。6.根據權利要求1所述的培養基的組合，其特征在于，所述IWR1在培養基IV中的濃度為5μM。7.根據權利要求1所述的培養基的組合，其特征在于，所述wnt-c59在培養基IV中的濃度為2μM。8.根據權利要求1所述的培養基的組合，其特征在于，所述培養基I、II、III和IV均包括下表1所示的組分、100,000U/L的青霉素和200μM的N乙酰半胱氨酸；表1 9.根據權利要求1～8中任一項所述的培養基的組合，其特征在于，所述胚胎干細胞為購自北京干細胞庫的商業化的胚胎干細胞。10.根據權利要求9所述的培養基的組合，其特征在于，所述胚胎干細胞是H7人胚胎干細胞。11.如權利要求1～10中任一項所述的培養基的組合的制備方法，所述方法包括以下步驟：1)根據待制備的培養基的總體積，計算所需基礎培養基RPMI-1640干粉的量；2)將RPMI-1640干粉溶于滅菌的去離子水中，攪拌均勻，每升加入2g碳酸氫鈉，并調節pH為7.2，然后將滲透壓值調至295-305，濾器過濾，4℃保存；3)按照1～3mg/L的L-肉毒堿、0.5～2mg/L的乙醇胺、10～20mg/L的腐胺、0.01～0.02mg/L的亞硒酸鈉、0.5～2mg/L的亞油酸、3～6mg/L的轉鐵蛋白的比例制備50×的儲液；4)按照50-200mg/L的維生素C和/或維生素C磷酸鎂鹽、50-500μM的N乙酰半胱氨酸的比例制備1000×的儲液；5)將步驟3)制備的儲液和步驟4)制備的儲液按照所需的量加入到步驟2)制得的基礎培養基中，即得培養基I；其中，所述方法還包括添加胰島素，得到培養基II的步驟；其中，所述方法還包括添加誘導小分子，得到培養基III的步驟；其中，所述方法還包括添加Wnt受體抑制劑IWR1或Wnt抑制劑wnt-c59，得到培養基IV的步驟。12.如權利要求11所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，將滲透壓值調至300。13.如權利要求11所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，使用5M氯化鈉儲液調節所述滲透壓值。14.如權利要求11所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，使用0.22μm的濾器過濾。15.如權利要求11所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，所述pH值使用濃鹽酸調節。16.如權利要求11所述的方法，其特征在于，在步驟3)中，按照2mg/L的L-肉毒堿、1mg/L的乙醇胺、16mg/L的腐胺、0.016mg/L的亞硒酸鈉、1mg/L的亞油酸、5mg/L的轉鐵蛋白的比例制備50×的儲液。17.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述步驟3)是通過包括以下步驟的方法實現的：根據制備的儲液的體積，計算所需L-肉毒堿、乙醇胺、腐胺、亞硒酸鈉、亞油酸和轉鐵蛋白的量，溶于滅菌的去離子水中，攪拌，過濾。18.如權利要求17所述的方法，其特征在于，所述過濾使用0.22μm的濾器。19.如權利要求17所述的方法，其特征在于，所述攪拌使用磁力攪拌器。20.如權利要求17所述的方法，其特征在于，所述方法還包括，在所述步驟3)中，將所述儲液分裝的步驟。21.如權利要求17所述的方法，其特征在于，在所述步驟3)中，將所述儲液置于-20℃或者-80℃保存。22.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述步驟4)是通過包括以下步驟的方法實現的：根據制備的儲液的體積，計算所需維生素C和/或維生素C磷酸鎂鹽、N乙酰半胱氨酸的量，溶于滅菌的去離子水中，攪拌，過濾。23.如權利要求22所述的方法，其特征在于，所述過濾使用0.22μm的濾器。24.如權利要求22所述的方法，其特征在于，所述攪拌使用磁力攪拌器。25.如權利要求22所述的方法，其特征在于，所述方法還包括，在所述步驟4)中，將所述儲液分裝的步驟。26.如權利要求22所述的方法，其特征在于，在所述步驟4)中，將所述儲液置于-20℃或者-80℃保存。27.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述步驟5)中還包括加入青鏈霉素并混合均勻的步驟；其中，所述青鏈霉素中鏈霉素的工作濃度為100mg/L，青霉素的工作濃度為100,000U/L。28.如權利要求11所述的方法，其特征在于，使用時，將所述培養基加熱至37℃。29.根據權利要求11-28中任一項所述的方法，其特征在于，所述添加胰島素的步驟是通過包括以下步驟的方法實現的：將所述培養基的pH調節為3，加入所需量的胰島素，充分溶解，直到溶液變清澈為止。30.根據權利要求11-28中任一項所述的方法，其特征在于，所述添加誘導小分子的步驟是通過包括以下步驟的方法實現的；將誘導小分子溶于微量的DMSO中，然后制備為1000×的儲液，將所述儲液按照所需的量加入到所述培養基中。31.根據權利要求30所述的方法，其特征在于，將所需量的誘導小分子溶于微量的DMSO中，然后溶于所需量的滅菌的去離子水中，攪拌，過濾，從而制得1000×的儲液；其中，使用的DMSO的量不超過所述儲液總體積的0.5％。32.一種將人胚胎干細胞誘導為心肌細胞的方法，所述方法包括使用如權利要求1～8中任一項所述的培養基的組合培養細胞的步驟，其中，所述胚胎干細胞為購自北京干細胞庫的商業化的人胚胎干細胞。33.如權利要求32所述的方法，其特征在于，所述胚胎干細胞為H7人胚胎干細胞。34.如權利要求33所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟:1)使用人胚胎干細胞制備單細胞懸液；2)將步驟1)中的細胞使用E8培養基培養2-3天，然后使用如權利要求1～8中任一項所述的培養基III培養細胞，從而誘導細胞開始分化；3)24小時后，吸走舊的培養基，添加新的如權利要求1～8中任一項所述的培養基I，并連續培養44-48小時，中間不換液；4)44-48小時后，吸走舊的培養基，然后使用如權利要求1～8中任一項所述培養基IV培養細胞，并連續培養44-48小時中間不換液；5)44-48小時后，吸走舊的培養基，然后使用如權利要求1～8中任一項所述的培養基I培養細胞，并連續培養72小時中間不換液；6)72小時后，吸走舊的培養基，加入如權利要求1～8中任一項所述的培養基II，連續培養48-72小時，在第48小時換液，從而得到心肌細胞。35.如權利要求34所述的方法，其特征在于，在步驟1)中，所述單細胞懸液的密度為1～1.5×10⁵/cm²。36.如權利要求34所述的方法，其特征在于，所述步驟1)是通過包括以下步驟的方法實現的：將培養5-6天的胚胎干細胞用Stempro Accutase酶，37℃消化10min，使干細胞克隆消化成單細胞，用DMEM/F12培養基洗一次，1000rpm離心5min；吸走上清，用添加10μM ROCK抑制劑Y27632的E8培養基重懸，然后以1～1.5×10⁵/cm²的接種密度接種。37.如權利要求34所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，將步驟1)中的細胞使用E8培養基培養2-3天，使細胞長到90％的飽和度。38.如權利要求34所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，所述培養基II的使用量為每2-3×10⁵的單細胞加入1mL培養基。39.如權利要求34所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，所述培養基III中GSK3β抑制劑CHIR99021的濃度為4μM。40.如權利要求34所述的方法，其特征在于，在步驟6)中，得到心肌細胞后，每隔2-3天換一次新鮮的如權利要求1～8中任一項所述的培養基II。41.根據權利要求34所述的方法，其特征在于，所述方法還包括檢測心肌誘導效率的步驟。42.根據權利要求41所述的方法，其特征在于，所述檢測心肌的誘導效率在細胞分化的第14天進行。43.根據權利要求41所述的方法，其特征在于，所述檢測使用流式細胞儀進行。44.根據權利要求41所述的方法，其特征在于，所述檢測使用心肌特異的標記物cTNT染色。