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一種用于檢測液體中游離miRNA的試劑盒及其操作方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-27
  • 技術成熟度:正在研發
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201310731048.5 
  • 技術(專利)名稱 一種用于檢測液體中游離miRNA的試劑盒及其操作方法 
  • 項目單位 中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所
  • 發明人 陳名利,殷建,白鵬利,王帆 
  • 行業類別 其他領域
  • 技術成熟度 正在研發
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 吳琛貝
  • 發布時間 2022-01-27  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種用于檢測液體中游離miRNA的試劑盒及其操作方法,包括A液和B液,A液和B液均是包含0.1M氯化鈉的0.1M Tris緩沖液,A液中包含羧基化磁珠,B液中包含羧基化微球,它們均通過碳化二亞胺法將末端氨基修飾的含有目標miRNA一半互補序列的單鏈DNA鏈接在磁珠或微球上。與傳統光波導生物傳感器比較,本案所涉及的試劑盒能夠實現重復利用;本發明采用的方法,能夠在溶液中快速檢測出游離的miRNA,過程更簡單,效率更高,并且能夠高通量的檢測樣品;通過連接微球,能夠顯著改變光波導免疫傳感器中諧振腔的折射率,提高檢測靈敏度。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種用于檢測液體中游離miRNA的試劑盒,其特征在于,包括A液和
    B液,其中:
    所述A液是包含0.1M氯化鈉的0.1M?Tris緩沖液,所述A液中還包含
    20~200nm的羧基化的磁珠;所述羧基化的磁珠通過碳化二亞胺法將末端氨
    基修飾的含有目標miRNA一半互補序列的單鏈DNA鏈接在磁珠上;
    所述B液是包含0.1M氯化鈉的0.1M?Tris緩沖液,所述B液中還包含
    20~200nm的羧基化的微球;所述羧基化的微球通過碳化二亞胺法將末端氨
    基修飾的含有目標miRNA另一半互補序列的單鏈DNA鏈接在微球上;
    所述A液和B液中,Tris緩沖液的pH均為7.3。
    2.一種用于非疾病診斷目的的檢測液體中游離miRNA的試劑盒的操作方
    法,其特征在于,包括以下步驟:
    1)將光波導免疫傳感器開啟,先通入A液,所述A液是包含0.1M氯化
    鈉的0.1M?Tris緩沖液,所述A液中還包含20~200nm的羧基化的磁珠;所
    述羧基化的磁珠通過碳化二亞胺法將末端氨基修飾的含有目標miRNA一半互
    補序列的單鏈DNA鏈接在磁珠上;在光波導免疫傳感器的電磁場作用下,所
    述羧基化的磁珠被吸附在光波導免疫傳感器的諧振腔外,產生基底光波導信
    號;
    2)隨后將待測樣品與B液等體積混合得到混合液,所述B液是包含0.1M
    氯化鈉的0.1M?Tris緩沖液,所述B液中還包含20~200nm的羧基化的微球;
    所述羧基化的微球通過碳化二亞胺法將末端氨基修飾的含有目標miRNA另一
    半互補序列的單鏈DNA鏈接在微球上;將所述混合液通入光學通道,此時步
    驟1)中吸附在諧振腔外的磁珠與混合液中的微球通過待測樣品中游離的
    miRNA結合在一起,以此改變諧振腔的折射率,使諧振腔內的光波導信號發
    生變化;
    3)配制至少四個含不同濃度的游離miRNA標準液,每個標準液按步驟1)
    和2)的操作方法得到兩個光波導信號值,以miRNA濃度為橫坐標,兩次光
    波導信號值差值為縱坐標,繪制標準曲線;
    4)將步驟1)和2)所得待測樣品的兩次光波導信號值差值與所述標準
    曲線比對,定量檢測出待測樣品中游離miRNA的存在及其濃度。
    3.根據權利要求2所述的用于非疾病診斷目的的檢測液體中游離miRNA
    的試劑盒的操作方法,其特征在于,所述A液和B液中,Tris緩沖液的pH
    均為7.3。
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