1.一種用于檢測液體中游離miRNA的試劑盒,其特征在于,包括A液和
B液,其中:
所述A液是包含0.1M氯化鈉的0.1M?Tris緩沖液,所述A液中還包含
20~200nm的羧基化的磁珠;所述羧基化的磁珠通過碳化二亞胺法將末端氨
基修飾的含有目標miRNA一半互補序列的單鏈DNA鏈接在磁珠上;
所述B液是包含0.1M氯化鈉的0.1M?Tris緩沖液,所述B液中還包含
20~200nm的羧基化的微球;所述羧基化的微球通過碳化二亞胺法將末端氨
基修飾的含有目標miRNA另一半互補序列的單鏈DNA鏈接在微球上;
所述A液和B液中,Tris緩沖液的pH均為7.3。
2.一種用于非疾病診斷目的的檢測液體中游離miRNA的試劑盒的操作方
法,其特征在于,包括以下步驟:
1)將光波導免疫傳感器開啟,先通入A液,所述A液是包含0.1M氯化
鈉的0.1M?Tris緩沖液,所述A液中還包含20~200nm的羧基化的磁珠;所
述羧基化的磁珠通過碳化二亞胺法將末端氨基修飾的含有目標miRNA一半互
補序列的單鏈DNA鏈接在磁珠上;在光波導免疫傳感器的電磁場作用下,所
述羧基化的磁珠被吸附在光波導免疫傳感器的諧振腔外,產生基底光波導信
號;
2)隨后將待測樣品與B液等體積混合得到混合液,所述B液是包含0.1M
氯化鈉的0.1M?Tris緩沖液,所述B液中還包含20~200nm的羧基化的微球;
所述羧基化的微球通過碳化二亞胺法將末端氨基修飾的含有目標miRNA另一
半互補序列的單鏈DNA鏈接在微球上;將所述混合液通入光學通道,此時步
驟1)中吸附在諧振腔外的磁珠與混合液中的微球通過待測樣品中游離的
miRNA結合在一起,以此改變諧振腔的折射率,使諧振腔內的光波導信號發
生變化;
3)配制至少四個含不同濃度的游離miRNA標準液,每個標準液按步驟1)
和2)的操作方法得到兩個光波導信號值,以miRNA濃度為橫坐標,兩次光
波導信號值差值為縱坐標,繪制標準曲線;
4)將步驟1)和2)所得待測樣品的兩次光波導信號值差值與所述標準
曲線比對,定量檢測出待測樣品中游離miRNA的存在及其濃度。
3.根據權利要求2所述的用于非疾病診斷目的的檢測液體中游離miRNA
的試劑盒的操作方法,其特征在于,所述A液和B液中,Tris緩沖液的pH
均為7.3。
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