1.一種葡萄糖代謝脫阻遏、高產蝦青素的法夫酵母(Phaffia
rhodozyma)突變株MK19,其保藏編號為CGMCC?No.3445。
2.根據權利要求1所述的葡萄糖代謝脫阻遏、高產蝦青素的法夫酵
母突變株MK19的培養方法,其特征在于該方法的步驟如下:
A、PDA固體斜面培養基配制如下:200g馬鈴薯經洗凈去皮切碎后,
加水1000ml煮沸半個小時,用紗布過濾,其濾液再加20g葡萄糖,混勻
后用去離子水補充液體體積至1000ml,在溫度115℃下滅菌15分鐘,得
到PDA液體培養基,往該PDA液體培養基中加入15g瓊脂,待瓊脂溶解、
凝固后得到PDA固體培養基;
B、配制液體種子培養基:將36-44g葡萄糖、3.6-4.4g酵母粉、2.0-2.8g
尿素、1.6-2.2g磷酸二氫鉀、0.4-0.6g硫酸鎂七水合物溶解于蒸餾水,定溶
至1000ml,調節pH至5.8-6.2;
C、配制液體低糖發酵培養基:將36-44g葡萄糖、3.6-4.4g酵母粉、
0.4-0.8g尿素、1.6-2.2g磷酸二氫鉀、0.4-0.6g硫酸鎂七水合物溶解于蒸餾
水,定溶至1000ml,調節pH至5.8-6.2;
D、配制液體高糖發酵培養基:將100-120g葡萄糖、3.6-4.4g酵母粉、
0.4-0.8g尿素、1.6-2.2g磷酸二氫鉀、0.4-0.6g硫酸鎂七水合物溶解于蒸餾
水,定溶至1000ml,調節pH至5.8-6.2;
E、培養條件與方法
(1)固體種子活化:將含有篩選突變株MK19的菌液涂布在步驟(A)
制備的PDA固體培養基平板上,在溫度21-25℃下進行斜面培養3-7天,
然后置于溫度3-5℃下保存;
從PDA斜面挑取菌苔接種至新鮮PDA斜面上,再在溫度24-26℃培
養3~7天,得到活化突變株MK19固體種子;
(2)液體種子活化:從上述(1)得到的活化突變株MK19固體種子挑
取兩環菌苔轉移到在步驟(B)制備的液體種子培養基中,在溫度24-26℃及
搖床振蕩速度180-220rpm下培養3天;得到的液體種子再以所述的液體
種子培養基體積計按照8-10%接種量加到所述的液體培養基中,在溫度
24-26℃與振蕩速度180-220rpm下培養35-40小時;采用紫外分光光度法
測定該培養液的OD值為9-12;
(3)發酵培養:上述(2)得到的活化液體種子以所述的低糖或高糖發
酵培養基體積計按照5-7%接種量接種至所述的低糖或高糖發酵培養基
中,在溫度24-26℃與振蕩速度200-240rpm下培養4-5天,得到所述突變
株MK19的發酵液。
3.根據權利要求2所述的方法,其特征在于將40g葡萄糖、4.0g酵
母粉、2.4g尿素、2.0g磷酸二氫鉀、0.5g硫酸鎂七水合物溶于蒸餾水中,
并定容至1000ml,制備得到所述的液體種子培養基。
4.根據權利要求2所述的方法,其特征在于將40g葡萄糖、4.0g酵
母粉、0.6g尿素、2.0g磷酸二氫鉀、0.5g硫酸鎂七水合物溶于蒸餾水,并
定容至1000ml中,制備得到所述的液體低糖發酵培養基。
5.根據權利要求2所述的方法,其特征在于將100g葡萄糖、4.0g酵
母粉、0.6g尿素、2.0g磷酸二氫鉀、0.5g硫酸鎂七水合物溶于蒸餾水中,
并定容至1000ml,制備得到所述的液體高糖發酵培養基。
6.根據權利要求2-5中任一權利要求所述的方法,其特征在于所述
突變株MK19發酵液的蝦青素含量是20-30mg/L。
7.根據權利要求6所述的方法,其特征在于所述的蝦青素含量是采
用高壓液相色譜法檢測的。
展開