本發明公開了一種積累N?乙酰神經氨酸重組枯草芽孢桿菌及其應用，屬于遺傳工程領域。本發明是以枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis 168ΔnagPΔnagPΔgamPΔgamAΔnagAΔnagBΔ1dhΔpta::lox72)作為表達宿主，通過過量共表達來源于釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae S288C)的氨基葡萄糖乙酰化酶編碼基因GNA1，來源于念珠藻(Anabaena sp.CH1)的N?乙酰氨基葡萄糖異構酶(AGE)和來源于大腸桿菌(Escherichia coli K1)的N?乙酰神經氨酸合酶(NeuB)，得到了積累N?乙酰神經氨酸枯草芽孢桿菌基因工程菌，N?乙酰神經氨酸產量達到190mg/L，為進一步代謝工程改造枯草芽孢桿菌生產N?乙酰神經氨酸奠定了基礎。

1.一種積累N-乙酰神經氨酸的重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，所述重組芽孢桿菌表達外源的氨基葡萄糖乙酰化酶編碼基因GNA1，N-乙酰氨基葡萄糖異構酶編碼基因AGE，N-乙酰神經氨酸合酶編碼基因NeuB，所述氨基葡萄糖乙酰化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述N-乙酰氨基葡萄糖異構酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述N-乙酰神經氨酸合酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述重組芽孢桿菌的宿主細胞為枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis 168ΔnagP ΔnagP ΔgamP ΔgamA ΔnagAΔnagBΔ1dh Δpta::lox72，所述氨基葡萄糖乙酰化酶編碼基因重組于基因組上整合表達，N-乙酰氨基葡萄糖異構酶編碼基因、N-乙酰神經氨酸合酶編碼基因重組于質粒上游離表達。2.權利要求1所述重組枯草芽孢桿菌的構建方法，其特征在于包括如下步驟：1)構建氨基葡萄糖乙酰化酶重組片段：克隆氨基葡萄糖乙酰化酶編碼基因GNA1，重組于枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis168ΔnagP ΔnagP ΔgamP ΔgamA ΔnagAΔnagBΔ1dh Δpta::lox72基因組上，得到工程菌B6C；2)構建重組質粒：克隆N-乙酰氨基葡萄糖異構酶編碼基因AGE、N-乙酰神經氨酸合酶編碼基因NeuB，連接到重組表達質粒pP43NMK上；3)構建產N-乙酰神經氨酸重組枯草芽孢桿菌：將上述重組表達載體轉化枯草芽孢桿菌B6C，得到產N-乙酰神經氨酸重組枯草芽孢桿菌B6CAN。3.權利要求1所述重組枯草芽孢桿菌在制備營養保健品方面的應用。4.權利要求3所述應用，其特征在于，所述重組枯草芽孢桿菌用于生產N-乙酰神經氨酸。5.權利要求4所述應用，其特征在于，所述生產，是將35-38℃、180-220rpm下培養10-20h的重組枯草芽孢桿菌以10％-20％的接種量轉入發酵培養基，于35-38℃、180-220rpm條件下發酵30-50h。