本發明公開了一種利用無機氮源的微藻光合兼養高密度發酵培養方法及應用。本發明涉及一種利用無機氮源的微藻高密度發酵培養方法，以無機氮鹽為無機氮源、葡萄糖為有機碳源的培養基，進行光合兼養培養，根據培養基氮源和碳源消耗及生物量增長情況，分段補加葡萄糖、無機氮鹽和其它營養鹽，合理調控營養鹽濃度、pH值、通氣量、光強和藻液攪動速度，使微藻短期內快速增值，縮短培養時間，保證微藻的高密度生長，實現微藻細胞生物量快速增長的同時對無機氮的高效吸收同化。本發明適用于以無機氮鹽為氮源的微藻高密度光合兼養發酵生產，為微藻在環境生態應用和生物能源生產的經濟可行性研究奠定了基礎。

1.一種利用無機氮源的微藻光合兼養高密度發酵培養方法在工業煙氣NOx生物脫硝和藻油
制備的聯合生產中的應用；
1).配制微藻培養基：
基礎培養基為1LBG11培養基中添加10-60g葡萄糖，無機氮鹽終濃度為1.5-9.0g/L；
補料液1為1L去離子水中含葡萄糖600-800g；
補料液2為1L去離子水中含無機氮鹽50-150g；
補料液3為1L去離子水中含K₂HPO₄·3H₂O40g，檸檬酸鐵銨6g，Na₂CO₃20g；
補料液4為1L去離子水中含MgSO₄·7H₂O75g，CaCl₂·2H₂O36g，檸檬酸6g，EDTA·2Na
1g；
補料液5為A₅溶液；
2).光照生物反應器中添加基礎培養基，培養體積為反應器體積的50％-80％，將微藻細
胞接種于光照生物反應器中，接種密度為1.0×10⁷-2.0×10⁷cells/mL，加入0.1％-0.5％v/v有
機硅消泡劑和0.01-0.05g/L氯霉素阻止泡沫產生和雜菌污染，平均光強為200-400μmolm^-2
s^-1，培養溫度為20-30℃，pH6.0-8.5，通入氣體為壓縮空氣，每L培養基通氣量為0.5-2.0L/min，
初始轉速200rpm，當培養規?！?0L，微藻生物量≥15.0×10⁷cells/mL或培養規模＞10
L，微藻生物量≥20.0×10⁷cells/mL時，生物量每增長1倍攪拌速度提高50-100rpm，最高
維持在400-500rpm；
3).在微藻光合兼養高密度發酵培養過程中，每24小時根據葡萄糖與無機氮鹽消耗情
況進行補料液1和補料液2的補料，使培養液中葡萄糖濃度為10-30g/L，C/N維持在5-10；
每24小時根據微藻生物量增長情況進行營養鹽補料，生物量的增長量為3.0×10⁷-4.5×10⁷
cells/mL時，補充補料液33mL/L，補料液44mL/L，補料液51mL/L各一次，每24小時只
補料一次；
4).生物量增長至60.0×10⁷-80.0×10⁷cells/mL時，停止進行補料液2的補料，替換為補加
工業煙氣NOx固定鹽溶液，使培養液NaNO₂含量至15-30g/L，每24小時根據消耗情況進
行補料使NaNO₂維持在15-30g/L；隨后每24小時根據葡萄糖消耗情況進行補料液1的補
料，使培養液中葡萄糖濃度為10-30g/L；根據微藻生物量增長情況進行營養鹽補料，生物
量的增長量為3.0×10⁷-4.5×10⁷cells/mL時，補充補料液33mL/L，補料液44mL/L，補料
液51mL/L各一次，每24小時只補料一次；生物量增長進入穩定期后停止發酵，收集藻液，
提取藻油。