1.一種雜交瘤細胞單克隆制備的篩選方法，其特征在于
(1)配制2倍DMEM基礎培養液：取Dulbecco改良型培養基干粉即DMEM
干粉10～15克，加純水300～500毫升，加入3～5克碳酸氫鈉并充分攪拌溶解，
用0.5～1.5摩爾每升鹽酸和0.5～1.5摩爾每升氫氧化鈉調節pH至7.0～7.4，過
濾除菌，制得2倍DMEM基礎培養液；
(2)配制L-谷氨酰胺母液：稱取L-谷氨酰胺1～10克，加純水50-300毫升
并加熱至完全溶解，除菌過濾，配制得濃度為200毫摩爾每升L-谷氨酰胺母液，
按每管4毫升分裝，冷凍保存；
(3)配制β-巰基乙醇母液：取50～80微升β-巰基乙醇，加入到50-120毫
升純水中，過濾除菌，配制得10毫摩爾每升母液，冷凍保存；
(4)配制甲基纖維素水溶液：稱取0.6～2.4克4000cp甲基纖維素或羥丙基
甲基纖維素，量取純水，分別在121～126℃滅菌30分鐘，無菌條件下量取17.5～
70毫升已滅菌純水加入到甲基纖維素中，2～8℃低溫條件下攪拌20～24小時；
(5)HAT半固體培養基配制：在步驟(4)配制的甲基纖維素水溶液中加入
步驟(1)配制的2倍DMEM基礎培養液15～60毫升，加入步驟(2)配制的
L-谷氨酰胺母液0.25～1毫升，加入步驟(3)配制的β-巰基乙醇母液0.5～2毫
升，再加入：胎牛血清10～40毫升，市售的100倍MEM非必需氨基酸0.5～2毫
升，10000單位每毫升青霉素和10000微克每毫升鏈霉素混合水溶液0.5～2毫
升，加入市售的50倍次黃嘌呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶溶液1～4毫升，2～8℃攪拌
3～6小時，即得到HAT半固體培養基，也即雜交瘤細胞單克隆化半固體培養基；
(6)融合后的細胞放置35～38℃預培養16～24小時，然后用5～20毫升預熱至
35～38℃的步驟(1)配制的2倍DMEM基礎培養液混勻，加入人類堿性成纖維細胞
生長因子200-800納克，再加入雜交瘤融合及克隆因子即HFCS0.5～2毫升，混勻，
再與步驟(5)配制的HAT半固體培養基輕輕混勻，35～38℃靜置10～30分鐘并排
除氣泡，分裝到平皿并于37℃下5％的CO2條件下培養；
(7)培養9～14天，其間不得將平皿或培養板拿出培養箱觀察，待皿中已長
出肉眼可見的克隆集落，用微量移液器將克隆從該培養基中吸取，移至細胞培養
板采用液體放大培養，每孔移入1個克隆，待細胞長至滿孔底1/2～2/3時，吸取
培養上清進行陽性檢測，選擇陽性孔直接放大凍存，進一步進行抗體特性鑒定或
腹水生產。
2.按權利要求1所述的雜交瘤細胞單克隆制備的篩選方法，其特征在于所述的
平皿為直徑35mm平皿或6孔細胞培養板。
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