本發(fā)明公開(kāi)了定量檢測(cè)白介素8的診斷試劑盒及其檢測(cè)方法，該試劑盒包含白介素8磁分離試劑，酶標(biāo)抗體，增強(qiáng)劑，校準(zhǔn)品、控制品，濃縮液以及底物。本發(fā)明試劑盒采用免疫磁微粒分離技術(shù)與競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫技術(shù)結(jié)合，具有更高的檢測(cè)靈敏度和特異性，并且大大縮短了檢測(cè)時(shí)間，可以在10分鐘內(nèi)檢測(cè)數(shù)個(gè)生物樣本，對(duì)于尿液、血清等樣本可以不需前處理直接進(jìn)行檢測(cè)。

1.一種定量檢測(cè)白介素8的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包含白介素8磁分離試劑，酶標(biāo)
抗體，增強(qiáng)劑，校準(zhǔn)品、控制品，濃縮液以及底物；所述試劑盒按照如下方法制備而成：
第一步：白介素8磁分離試劑的制備步驟：
1)將1.0mg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul?DMSO中，取2mg白介素8單克隆抗體溶于pH9.5
的0.1mol/LPB緩沖液中至總體積為1ml；
2)用移液槍吸取步驟1)中的辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1)的抗體溶液中，置室溫
90min；
3)將步驟2)獲得的溶液加入到濃縮管中然后放入到高速冷凍離心機(jī)中在3000g下濃縮30min
至體積為0.5ml；
4)取0.5ml磁珠，加入5ml反應(yīng)杯中，放入試管架，經(jīng)磁鐵吸附2分鐘后吸取上清；
5)加入步驟3)獲得的抗體溶液，混勻后室溫反應(yīng)4小時(shí)；
6)加入0.3ml1mol/L的TRIS溶液37℃15分鐘；
7)加入1.5ml?pH7.20.1mol/L?PB清洗已經(jīng)標(biāo)記的磁珠，混勻30秒，上架，去上清；
8)用100ml磁珠保存液將磁珠轉(zhuǎn)入125ml玻璃瓶；磁珠保存液配方為0.1％BSA，0.05％吐溫
-20，0.02％NaN3，20％乙醇，4℃保存；
9)將步驟8)獲得的溶液用磁珠緩沖液按照1：1的體積比例混勻，即得磁分離試劑；所述磁
珠緩沖液為濃度是1mol/L的TRIS-HCl緩沖液；
第二步：酶標(biāo)抗體制備步驟：
1)2.5mg白介素8單克隆抗體溶于1.0ml的N，N-二甲基甲酰胺中，加入1ml的10mg/ml辣根
過(guò)氧化物酶水溶液和1.3mg碳化二亞胺，1小時(shí)后將1.0ml20mg/ml的碳化二亞胺加入，混合
物不斷攪拌，4℃過(guò)夜；
2)將步驟1)的溶液裝入透析袋中，對(duì)0.15M的pH7.4PBS透析，4℃過(guò)夜，收集保留液；然
后加入10ml濃度為15mg/ml的BSA溶液，4℃儲(chǔ)存?zhèn)溆茫蛔詈髮⑸鲜鋈芤河妹笜?biāo)抗體稀釋液
以1：1000的體積比混合均勻，即得酶標(biāo)抗體；所述酶標(biāo)抗體稀釋液為濃度是1mol/L的
TRIS-HCl緩沖液；
第三步：增強(qiáng)劑配制步驟：
1)稱(chēng)取TRIS1.56g和NaCl4.23g于1L容器中；用移液器將Proclin-300量取0.2ml于10ml純
化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中；
2)用量筒量取800ml純化水于上述1L容器中，充分?jǐn)嚢瑁敝镣耆芙猓{(diào)pH在7.35-7.45
之間；
3)稱(chēng)取Mak330.9g于上述1L容器中；最后定容1000ml，完全溶解后，用0.2um濾器過(guò)濾；
第四步：
校準(zhǔn)品和控制品的配制：
將白介素8配制濃度分別為0.10、0.20、0.40、0.80、1.60ng/ml的校準(zhǔn)品；將白介素8配制成
濃度分別為0.20、0.80ng/ml的控制品；
第五步：
濃縮液配制步驟，配制1L：
1)稱(chēng)取TRIS12.54g和NaCl325.6g于1L容器中；
2)稱(chēng)取5g?Tween-20于100ml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述1L容器中；
3)用移液器將Proclin-300量取0.2ml于盛有10ml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述1L
容器中；
4)用量筒量取800ml純化水于上述1L容器中，充分?jǐn)嚢瑁敝镣耆芙猓?br/>5)調(diào)pH，控制其范圍在7.35-7.45之間；
6)最后定容1000ml，完全溶解后用0.2um濾器過(guò)濾即得；
第六步：
底物配制步驟，配制1L：
1)稱(chēng)取TRIS2.35g、NaCl6.41g、Na₂SO₃0.002g和Proclin-3000.2ml于1L燒杯中；
2)用量筒量取600ml純化水于1L燒杯中，充分?jǐn)嚢瑁敝镣耆芙猓{(diào)pH在7.95-8.05之間；
3)加入250ml?Lumi-Phos530后，用0.2um濾器過(guò)濾收集濾液，用純化水定容至1000ml，混
勻后即得。