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高效裂解串聯基因,高效裂解質粒及構建方法和應用

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-07-26
  • 技術成熟度:詳情咨詢
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201310030717.6 
  • 技術(專利)名稱 高效裂解串聯基因,高效裂解質粒及構建方法和應用 
  • 項目單位 山東省農業科學院畜牧獸醫研究所
  • 發明人 王金寶,張玉玉,吳家強,王可,杜以軍,李俊,于江,彭軍 
  • 行業類別 其他領域
  • 技術成熟度 詳情咨詢
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 韓夢蕊
  • 發布時間 2021-07-26  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及基因工程領域,特別涉及一種由噬菌體PhiX174突變裂解基因mE和葡萄球菌核酸酶A基因SNA組成的高效裂解串聯基因,基因序列如序列表中序列3所示。含有上述高效裂解串聯基因的高效裂解質粒。高效裂解質粒在制備菌蛻中的應用。本發明構建的安全高效的裂解質粒pBV-mELS能夠在大腸桿菌菌液OD值達到1.0以上時進行誘導,裂解效率可到達99.99995%,不僅突破了裂解基因E介導的裂解過程依賴宿主細菌生長狀態(OD為0.4~0.6)的局限性,大大提高了菌蛻的產量,還能夠有效清除菌蛻中殘存的遺產物質,降低了危害性遺傳元件(抗生素抗性基因和病原決定簇基因)的側向傳播。
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  • 02

    說明書

    1.一種高效裂解串聯基因,其特征是基因序列如序列表中序列3所示。2.根據權利要求1所述的高效裂解串聯基因,其特征是由噬菌體PhiX174突變裂解基因mE和葡萄球菌核酸酶A基因SNA串聯組成的。3.含有上述權利要求1或2所述的高效裂解串聯基因的高效裂解質粒。4.根據權利要求3所述的高效裂解質粒,其特征是將權利要求1或2所述的高效裂解串聯基因酶切插入pBV220載體中。5.一種權利要求3或4所述的高效裂解質粒的構建方法,其特征是包括以下步驟:(1)以噬菌體PhiX174?RFI?DNA為模板、以序列表中的序列4和序列5為引物進行PCR擴增,獲得突變裂解基因mE;(2)以金黃色葡萄球菌基因組DNA為模板、序列表中序列6和序列7為引物進行PCR擴增,獲得葡萄球菌核酸酶A基因;(3)將步驟(1)中得到的突變裂解基因mE和步驟(2)中得到的葡萄球菌核酸酶A基因作為下一步PCR反應的模板,用序列表中的序列4和序列7進行擴增,得到串聯基因;(4)將串聯基因應用EcoR?I和Sal?I限制性內切酶進行雙酶切,酶切產物與經EcoR?I和SalI雙酶切的pBV220載體連接,得到高效裂解質粒。6.根據權利要求5所述的構建方法,其特征是將步驟(4)得到的高效裂解質粒轉化大腸桿菌DH5α感受態細胞,30℃過夜培養16?h,挑取單菌落于氨芐青霉素抗性的LB培養基中30℃過夜振蕩培養,提取質粒,保留鑒定為陽性的質粒。7.一種權利要求3或4所述的高效裂解質粒在制備菌蛻中的應用。8.根據權利要求7所述的應用,其特征在于所述菌蛻為腸桿菌科的菌蛻。9.根據權利要求7所述的應用,其特征是包括以下步驟:(1)將含有所述高效裂解質粒的大腸桿菌DH5α在30℃培養至OD600值達到1.0-1.2;(2)培養溫度升高至42℃誘導高效裂解串聯基因的表達;(3)在升溫誘導90?min時添加終濃度為10mM的?CaCl2和1mM?的MgCl2,來激活SNA的活性;(4)升溫誘導4h時,收集步驟(3)獲得的菌蛻,洗滌后保存。
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專利技術附圖

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