1.用于檢測樣品中能夠修飾所提供底物的酶的存在的酶檢測裝
置,包含:
(i)層析介質或固相支持物;
(ii)含有連接區域和修飾區的底物,所述修飾區對從未修飾狀態
轉變為修飾狀態的酶修飾敏感;
(iii)固定化在層析介質上或其中或者固定化在固相支持物上并能
夠與底物的連接區域結合的第一種捕獲識別分子;
(iv)底物識別分子,其能夠與未修飾狀態的修飾區特異性結合,
底物識別分子的結合位點,使得當混合時,與酶相比,底物的修飾區
傾向于被所述底物識別分子結合;以及
(iii)與底物識別分子偶聯的可檢測標記物。
2.權利要求1的酶檢測裝置,其中連接區域是不可修飾的配體。
3.權利要求1或2的酶檢測裝置,其還含有固定化在層析介質上
或其中,并能夠任選的與底物的片段組合與底物識別分子結合的第二
種捕獲識別分子。
4.權利要求1或2的酶檢測裝置,其中酶是水解酶,激酶、糖基
轉移酶、氧化酶、還原酶或轉氨酶。
5.權利要求4的酶檢測裝置,其中水解酶為肽酶、糖酶、神經氨
酸酶或酯酶。
6.權利要求5的酶檢測裝置,其中酯酶為脂肪酶、核酸酶、磷酸
酯酶、硫酸酯酶、DNA酶或RNA酶。
7.權利要求1或2的酶檢測裝置,其中可檢測標記物與底物識別
分子共價結合。
8.權利要求1或2的酶檢測裝置,其中標記物是熒光團、金顆粒、
生色團、發光化合物;放射活性化合物;脂質體或其他含有信號產生
物質的囊泡,電活性物質,或酶與其底物的組合。
9.權利要求1或2的酶檢測裝置,包含第一和第二種底物,它們
各含修飾區,第一種底物的修飾區對第一種酶的修飾敏感,第二種底
物的修飾區對第二種酶的修飾敏感。
10.能夠修飾底物的酶的檢測方法,包括下列步驟:
(i)提供含有連接區域和修飾區的底物,該修飾區對從未修飾狀
態轉變為修飾狀態的酶修飾敏感,提供固相支持物以及通過在固相支
持物上提供能夠與連接區域結合的第一種捕獲識別分子來將底物的連
接區域連接到固相支持物上;
(ii)提供懷疑含有酶的樣品;
(iii)提供偶聯有可檢測標記物的底物識別分子,其中底物識別分
子與未修飾狀態下的修飾區特異性結合,底物識別分子的結合位點,
使得當混合時,與酶相比,底物的修飾區傾向于被所述底物識別分子
結合;
(iv)將樣品與底物混合,使得樣品中的至少一些酶修飾底物;
(v)使底物與底物識別分子相接觸,并檢測標記物的存在;或者
(i)提供含有連接區域和修飾區的底物,該修飾區對從未修飾狀
態轉變為修飾狀態的酶修飾敏感;
(ii)提供懷疑含有酶的樣品;
(iii)提供偶聯有可檢測標記物的底物識別分子,其中底物識別分
子與未修飾狀態下的修飾區特異性結合,底物識別分子的結合位點,
使得當混合時,與酶相比,底物的修飾區傾向于被所述底物識別分子
結合;
(iv)將樣品與底物混合,使得樣品中的至少一些酶修飾底物;
(v)將底物和底物識別分子沉積在層析介質上或其中,其中層析
介質含有固定化在層析介質上或其中的第一種捕獲識別分子,第一種
捕獲識別分子能夠結合連接區域,使底物與底物識別分子相接觸,并
檢測標記物的存在。
11.權利要求10的方法,其中連接區域是不可修飾的配體。
12.權利要求10或11的方法,其還含有固定化在層析介質上或
其中的第二種捕獲識別分子,第二種捕獲識別分子任選的與底物的片
段組合能夠結合底物識別分子,其中該方法還包括檢測底物識別分子
在第二種捕獲識別分子上的存在的步驟。
13.權利要求10或11的方法,其中酶是水解酶、激酶、糖基轉
移酶、氧化酶、還原酶或轉氨酶。
14.權利要求13的方法,其中水解酶是肽酶、糖酶、神經氨酸酶
或酯酶。
15.權利要求14的方法,其中酯酶是脂肪酶、核酸酶、磷酸酯酶、
硫酸酯酶、DNA酶或RNA酶。
16.權利要求14的方法,其中糖酶是同寡糖酶或異寡糖酶、或者
同多糖酶或異多糖酶。
17.權利要求10或11的方法,其中標記物與底物識別分子共價
結合。
18.權利要求10或11的方法,其中標記物是熒光團、金顆粒、
生色團、發光化合物;放射活性化合物;脂質體或其他含有信號產生
物質的囊泡,電活性物質;或酶與其底物的組合。
19.權利要求10或11的方法,其中步驟(i)包含提供第一和第二種
底物,它們各含修飾區,第一種底物的修飾區對第一種酶敏感,第二
種底物的修飾區對第二種酶的修飾敏感,并且其中步驟(v)包含檢測第
一和第二種底物與底物識別分子之間的相互作用。
20.權利要求19的方法,其中步驟(iii)包含提供第一和第二種底
物識別分子,它們各自分別與未修飾狀態下的第一和第二種底物的修
飾區特異性結合,與第一種酶相比,第一種底物的修飾區傾向于被所
述第一種底物識別分子結合,與第二種酶相比,第二種底物的修飾區
傾向于被所述第二種底物識別分子結合,并且其中步驟(v)包含檢測第
一和第二種底物與第一和第二種底物識別分子之間的相互作用。
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