本發明公開了一種Ki67 mRNA實時熒光定量RT-PCR檢測試劑盒；屬生物技術領域。為一種檢測腫瘤增殖相關基因Ki67 mRNA的實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應試劑盒。該試劑盒對樣品中存在的Ki67 mRNA通過逆轉錄(RT)得到cDNA，再結合實時熒光定量PCR檢測技術，通過設計的特異性引物和探針精確定量檢測標本中Ki67 mRNA的表達量。該試劑盒可以用于臨床檢測腫瘤患者外周血、淋巴結、骨髓、手術切除組織、細胞株等標本中Ki67 mRNA表達。有益效果是：采用了PCR擴增技術，使得檢測Ki67 mRNA的敏感性大大提高，能保證在極少的標本中獲得足夠的信息。熒光探針的應用，使得檢測的特異性大大提高，能有效降低常規PCR擴增的假陽性率。

1.一種Ki67mRNA實時熒光定量RT-PCR檢測試劑盒，其特征是：含有逆
轉錄RT反應液、莫洛尼氏鼠白血病病毒M-MLV逆轉錄酶、RNA酶抑制劑
Rnasin、聚合酶鏈PCR反應液、耐熱DNA聚合酶Taq、標準品、陰性對照和陽
性對照；聚合酶鏈PCR反應液中含有聚合酶鏈反應緩沖液、MgCl₂、dNTPs、擴
增Ki67?cDNA所用上游引物、下游引物、熒光探針；擴增用上游引物序列為：
5’-GGGAAAGTAGGTGTGAAAGAAGAG-3’；擴增用下游引物序列為：
5’-ATCTGCTTTGGAGACTCCTTAAAC-3’；探針為熒光探針，其序列為：
5’-FAM-CCTAGCAGTCGGCAAGTTCACACGG-TAMRA-3’。
2.如權利要求1所述的Ki67mRNA實時熒光定量RT-PCR檢測試劑盒，其
特征是：逆轉錄RT反應液中含有寡聚dT_15-18、dNTPs、DEPC-H₂O。
3.如權利要求1所述的Ki67mRNA實時熒光定量RT-PCR檢測試劑盒，其
特征是：標準品序列為：
GGGAAAGTAG?GTGTGAAAGA?AGAGCTCCTA?GCAGTCGGCA
AGTTCACACG?GACGTCAGGG?GAGACCACGC?ACACGCACAG
AGAGCCAGCA?GGAGATGGCA?AGAGCATCAG?AACGTTTAAG
GAGTCTCCAA?AGCAGAT。
4.如權利要求1所述的Ki67mRNA實時熒光定量RT-PCR檢測試劑盒，其
特征是：陰性對照為無Ki67mRNA的RNA樣品，陽性對照為含有Ki67mRNA
的RNA樣品。