本發明涉及一種EML4-ALK融合基因熒光定量PCR檢測的試劑盒，適用于肺腺癌中EML4-ALK融合基因突變的檢測。本發明所述的試劑盒包括針對EML4-ALK融合基因9種融合變體的保守序列特異設計的探針及引物以及陽性對照物。該試劑盒能快速、準確、高敏感度地檢測9種最常見的EML4-ALK融合基因變體，包括亞型1（E13；A20）、亞型2（E20；A20）、亞型3（E6a/b；A20）、亞型4（E14；A20）、亞型5（E2a/b；A20）、亞型6（E18；A20）、亞型7（E14；A20）7種變異亞型的9種融合變體，從而建立檢測9種最常見EML4-ALK融合基因變體的實時熒光定量PCR體系。

1.一種EML4-ALK融合基因熒光定量PCR檢測試劑盒，包括熒光定量反
應液預混液、熒光定量反應液、陽性對照樣品，其特征在于：
所述熒光定量反應液包括：熒光定量反應液A、熒光定量反應液B、熒光定
量反應液C、熒光定量反應液D、熒光定量反應液E、熒光定量反應液F、熒光
定量反應液G、熒光定量反應液H、熒光定量反應液I；
其中，所述熒光定量反應液A包括：檢測EML4-ALK亞型1（E13；A20）
融合基因的序列為SEQ?ID?NO.1的正向引物、序列為SEQ?ID?NO.2的反向引物
和序列為SEQ?ID?NO.3的探針；
所述熒光定量反應液B包括：檢測EML4-ALK亞型2（E20；A20）融合基
因的序列為SEQ?ID?NO.4的正向引物、序列為SEQ?ID?NO.5的反向引物和序列
為SEQ?ID?NO.6的探針；
所述熒光定量反應液C包括：檢測EML4-ALK亞型3a（E6a；A20）融合
基因的序列為SEQ?ID?NO.7的正向引物、序列為SEQ?ID?NO.8的反向引物和序
列為SEQ?ID?NO.9的探針；
所述熒光定量反應液D包括：檢測EML4-ALK亞型3b（E6b；A20）融合
基因的序列為SEQ?ID?NO.10的正向引物、序列為SEQ?ID?NO.11的反向引物和
序列為SEQ?ID?NO.12的探針；
所述熒光定量反應液E包括：檢測EML4-ALK亞型4（E14；A20）融合基
因的序列為SEQ?ID?NO.13的正向引物、序列為SEQ?ID?NO.14的反向引物和序
列為SEQ?ID?NO.15的探針；
所述熒光定量反應液F包括：檢測EML4-ALK亞型5a（E2a；A20）融合基
因的序列為SEQ?ID?NO.16的正向引物、序列為SEQ?ID?NO.17的反向引物和序
列為SEQ?ID?NO.18的探針；
所述熒光定量反應液G包括：檢測EML4-ALK亞型5b（E2b；A20）融合
基因的序列為SEQ?ID?NO.19的正向引物、序列為SEQ?ID?NO.20的反向引物和
序列為SEQ?ID?NO.21的探針；
所述熒光定量反應液H包括：檢測EML4-ALK亞型6（E18；A20）融合基
因的序列為SEQ?ID?NO.22的正向引物、序列為SEQ?ID?NO.23的反向引物和序
列為SEQ?ID?NO.24的探針；
所述熒光定量反應液I包括：檢測EML4-ALK亞型7（E14；A20）融合基
因的序列為SEQ?ID?NO.25的正向引物、序列為SEQ?ID?NO.26的反向引物和序
列為SEQ?ID?NO.27的探針；
所述陽性對照樣品包括：陽性對照樣品A、陽性對照樣品B、陽性對照樣品
C、陽性對照樣品D、陽性對照樣品E、陽性對照樣品F、陽性對照樣品G、陽
性對照樣品H、陽性對照樣品I；
其中，所述陽性對照樣品A包含所檢測EML4-ALK亞型1（E13；A20）融
合基因基因組片斷DNA質粒；
所述陽性對照樣品B包含所檢測EML4-ALK亞型2（E20；A20）融合基因
基因組片斷DNA質粒；
所述陽性對照樣品C包含所檢測EML4-ALK亞型3a（E6a；A20）融合基
因基因組片斷DNA質粒；
所述陽性對照樣品D包含所檢測EML4-ALK亞型3b（E6b；A20）融合基
因基因組片斷DNA質粒；
所述陽性對照樣品E包含所檢測EML4-ALK亞型4（E14；A20）融合基因
基因組片斷DNA質粒；
所述陽性對照樣品F包含所檢測EML4-ALK亞型5a（E2a；A20）融合基因
基因組片斷DNA質粒；
所述陽性對照樣品G包含所檢測EML4-ALK亞型亞型5b（E2b；A20）融
合基因基因組片斷DNA質粒；
所述陽性對照樣品H包含所檢測EML4-ALK亞型6（E18；A20）融合基因
基因組片斷DNA質粒；
所述陽性對照樣品I包含所檢測EML4-ALK亞型7（E14；A20）融合基因
基因組片斷DNA質粒。
2.根據權利要求1所述的熒光定量PCR檢測試劑盒，其特征在于：所述探
針均為熒光探針，5′端標記FAM熒光報告基團，3’端標記TAMRA熒光淬滅基
團。