本發(fā)明公開(kāi)了一種基于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)的試劑盒及其應(yīng)用。本發(fā)明提供了輔助鑒定南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)的專(zhuān)用引物，由序列表的序列1至5所示DNA組成。本發(fā)明提供的試劑盒含有所述專(zhuān)用引物。本發(fā)明設(shè)計(jì)特異性的引物并優(yōu)化反應(yīng)條件，提供了一種輔助鑒定南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)的試劑盒，應(yīng)用該試劑盒可使檢測(cè)達(dá)到種間水平，解決常規(guī)分子檢測(cè)成本高、效率低、難以服務(wù)于基層農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的問(wèn)題。

1.輔助鑒定南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)的專(zhuān)用引物，由序列表的序列1所示DNA、序列表的序
列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA、序列表的序列4所示DNA和序列表的序列5
所示DNA組成。
2.權(quán)利要求1所述專(zhuān)用引物在制備試劑盒中的應(yīng)用；所述試劑盒用于輔助鑒定南
方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)和/或檢測(cè)待測(cè)樣本是否含有南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)。
3.一種含有權(quán)利要求1所述專(zhuān)用引物的試劑盒；所述試劑盒用于輔助鑒定南方根
結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)和/或檢測(cè)待測(cè)樣本是否含有南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)；
所述試劑盒含有Bst?DNA聚合酶；
所述試劑盒還含有10倍LAMP反應(yīng)液和/或樣品預(yù)處理液和/或熒光染料SYBR?
Green?I；
所述10倍LAMP反應(yīng)液由溶質(zhì)和溶劑組成；所述溶劑為水；所述溶質(zhì)及其在所述
10倍LAMP反應(yīng)液中的濃度如下：10mM?dNTP、pH8.8200mM?Tris-鹽酸、100mM氯化
鉀、100mM硫酸銨、40mM硫酸鎂、1%體積比的曲拉通X-100和4M甜菜堿；
所述樣品預(yù)處理液由溶質(zhì)和溶劑組成；所述溶劑為水；所述溶質(zhì)及其在所述樣品
預(yù)處理液中的濃度如下：50mM氯化鉀、pH8.210mM?Tris、2.5mM氯化鎂、60μg/mL蛋
白酶K、0.45%體積比的吐溫20和0.01%明膠。
4.權(quán)利要求1所述專(zhuān)用引物在輔助鑒定南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)中的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1所述專(zhuān)用引物在檢測(cè)待測(cè)樣本是否含有南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)中的應(yīng)用。
6.一種輔助鑒定南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)的方法，是用權(quán)利要求1所述專(zhuān)用引物對(duì)待測(cè)線(xiàn)蟲(chóng)
的基因組DNA進(jìn)行環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增，然后進(jìn)行如下（1）和/或（2）和/或（3）：
（1）加入SYBR?Green?I，如果環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增體系顯示為綠色，待測(cè)線(xiàn)蟲(chóng)為候
選的南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)，如果環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增體系顯示為橙色，待測(cè)線(xiàn)蟲(chóng)為候選的非南方
根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)；
（2）如果環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增體系中生成白色沉淀，待測(cè)線(xiàn)蟲(chóng)為候選的南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)，
如果環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增體系中沒(méi)有生成白色沉淀，待測(cè)線(xiàn)蟲(chóng)為候選的非南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)；
（3）如果反應(yīng)產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳顯示梯狀條帶，待測(cè)線(xiàn)蟲(chóng)為候選的南方根結(jié)
線(xiàn)蟲(chóng)，如果反應(yīng)產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳不顯示梯狀條帶，待測(cè)線(xiàn)蟲(chóng)為候選的非南方根
結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述待測(cè)線(xiàn)蟲(chóng)為南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)、爪哇
根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)、花生根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)、北方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)、大豆胞囊線(xiàn)蟲(chóng)、禾谷胞囊線(xiàn)蟲(chóng)、甘薯腐爛
莖線(xiàn)蟲(chóng)、松材線(xiàn)蟲(chóng)、擬松材線(xiàn)蟲(chóng)或象耳豆跟結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)。