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17個X染色體短串聯重復序列的復合擴增試劑盒

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-10
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201410003989.1 
  • 技術(專利)名稱 17個X染色體短串聯重復序列的復合擴增試劑盒 
  • 項目單位 基點認知技術(北京)有限公司
  • 發明人 張威,張琰 
  • 行業類別 其他領域
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 衛麗梅
  • 發布時間 2021-12-10  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及17個X染色體短串聯重復序列的復合擴增試劑盒,用于同時分析多個X?STR基因座,其特征在于:復合擴增17個基因座:Amelogenin、DXS6795、DXS9902、DXS8378、HPRTB、GATA165B12、DXS7132、DXS7424、DXS6807、DXS6803、GATA172D05、DXS6800、DXS10134、GATA31E08、DXS10159、DXS6789和DXS6810。本發明還涉及同時分析DNA樣品的方法和試劑盒,以及它們的用途。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種同時分析多個X-STR基因座的復合擴增方法,其不用于疾病的診斷和治療,其特
    征在于:
    在一個復合擴增反應體系中同時擴增17個基因座:Amelogenin、DXS6795、DXS9902、
    DXS8378、HPRTB、GATA165B12、DXS7132、DXS7424、DXS6807、DXS6803、GATA172D05、DXS6800、
    DXS10134、GATA31E08、DXS10159、DXS6789和DXS6810;
    將17個基因座分為下述四組:
    第一組為DXS6795、DXS9902、DXS8378、和HPRTB;
    第二組為Amelogenin、GATA165B12、DXS7132、DXS7424和DXS6807;
    第三組為DXS6803、GATA172D05、DXS6800和DXS10134;
    第四組為GATA31E08、DXS10159、DXS6789和DXS6810;
    針對上述分組在基因座重復序列的側翼分別設計特異性引物,使得基因座組內各個片
    段峰值均衡性達到40%以上,引物分為如下組合:
    第一組引物為SEQ ID NO:13-14、29-30、27-28、9-10所示;
    第二組引物為SEQ ID NO:1-2、5-6、23-24、25-26、19-20所示;
    第三組引物為SEQ ID NO:17-18、7-8、15-16、31-32所示;
    第四組引物為SEQ ID NO:3-4、33-34、11-12、21-22所示;
    每組引物分別由不同熒光素標記,其中基因座被位于該基因座兩側的一對引物擴增,
    其中每對引物中有一個引物的5’端進行熒光素標記;
    將上述四組基因座復合擴增,根據產物峰高情況調整各基因座引物濃度,使各基因座
    峰值整體均衡性達到30%以上。
    2.如權利要求1所述同時分析多個X-STR基因座的復合擴增方法,其特征在于,
    該復合擴增體系為25μl擴增體系,包括5μl SEQ ID NO:1-34所示的引物混合物、10μl
    反應緩沖液和2U~4U的熱啟動Taq DNA聚合酶;所述反應緩沖液包括:50mM KCl,10mM
    Tris-HCl,2.0mM MgCl2,0.1mg/ml牛血清白蛋白和0.2mM的dNTP;
    采用以下程序進行:
    1)制作模板DNA;
    2)聚合酶鏈式反應(PCR)擴增,
    每25μl擴增體系包括10μl反應緩沖液,5μl引物混合物,0.5μl熱啟動Taq DNA聚合酶,7
    μl去離子水,將上述組分配成混合液,混勻后分裝至PCR反應管中,將2.5μl模板DNA加入PCR
    反應管中;
    按照下面的反應條件設置熱循環儀,將PCR反應管放入熱循環儀中開始擴增基因片段,
    95℃保溫11分鐘;94℃保溫30秒鐘,60℃保溫60秒鐘,70℃保溫60秒鐘,運行30個循環;60℃
    保溫30分鐘;4℃持續保溫直至取出樣品;
    3)電泳、檢測
    取0.5μl分子量內標和10μl去離子甲酰胺,乘以樣品數,配成混合液;
    以每管10μl混合液,再分別加入1μl擴增產物和等位基因階梯,離心將液體收集到離心
    管的底部;
    樣品95℃變性4分鐘,然后迅速冰上冷卻4分鐘,使DNA完全變性并保持變性狀態;
    將樣品放在基因分析儀中開始電泳檢測;
    電泳結束,分析實驗數據得到圖譜和基因分型結果。
    3.一種用于權利要求1或2所述的復合擴增方法的如SEQ ID NO:1-34的引物的混合物。
    4.一種應用權利要求1或2所述復合擴增方法的17個X染色體短串聯重復序列的復合擴
    增試劑盒,所述基因座為Amelogenin、DXS6795、DXS9902、DXS8378、HPRTB、GATA165B12、
    DXS7132、DXS7424、DXS6807、DXS6803、GATA172D05、DXS6800、DXS10134、GATA31E08、
    DXS10159、DXS6789和DXS6810,該試劑盒包含SEQ ID NO:1-34所示的引物。
    展開

專利技術附圖

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