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一種基于青霉素結合蛋白的檢測β-內酰胺類抗生素的方法及專用試劑盒和試紙條

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-09-02
  • 技術成熟度:正在研發
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201110057523.6 
  • 技術(專利)名稱 一種基于青霉素結合蛋白的檢測β-內酰胺類抗生素的方法及專用試劑盒和試紙條 
  • 項目單位 北京維德維康生物技術有限公司
  • 發明人 沈建忠,江海洋,吳小平,徐飛,王戰輝,趙寧,楊麗麗,李向梅,李艷偉 
  • 行業類別 藥品-衛生用品
  • 技術成熟度 正在研發
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 楊惠雯
  • 發布時間 2021-09-02  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種基于青霉素結合蛋白的檢測β-內酰胺類抗生素的方法及專用試劑盒和試紙條。本發明的用于檢測β-內酰胺類抗生素的受體試劑盒,包括:SEQ ID NO:1所示蛋白、酶標記的氨芐西林和標準品溶液,所述標準品為青霉素G。本發明試劑盒和膠體金試紙卡具有靈敏度高、準確度高、精密度高、成本低、操作簡單、檢測時間短、適合各種單位使用、儲存簡單、保質期長的優點;能同時快速檢測大批量樣品,可實現現場高通量快速檢測。因此,本發明的試劑盒、膠體金試紙及檢測方法在β-內酰胺類抗生素的檢測中將發揮重大作用。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種用于檢測β-內酰胺類抗生素的受體試劑盒,包括:SEQ?ID?NO:1所示蛋
    白、酶標記的氨芐西林和標準品溶液,所述標準品為青霉素G;
    所述受體試劑盒還包括底物顯色液、終止液、洗滌液、樣品稀釋液、包被緩沖液
    和封閉液;
    底物顯色液由A液和B液組成,A液為質量百分含量為2%的過氧化脲的水溶液,
    B液為質量百分含量為1%的四甲基聯苯胺的水溶液;
    終止液為0.2M的硫酸水溶液;
    每1升所述洗滌液是按照如下方法配制得到的:將0.5ml吐溫20、5g疊氮化鈉
    和990ml磷酸鹽緩沖液混合,得到所述洗滌液;所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0.01M,pH
    值為7.4;
    樣品稀釋液:0.1mol/L、pH值為7.2的磷酸鹽緩沖液;
    每1升包被緩沖液按照如下方法制備:將Na2CO31.59g和NaHCO32.93g溶于1升
    水中,用水定容至1升,得到所述包被緩沖液;
    每1升封閉液按照如下方法配制:將50mgBSA、1g疊氮化鈉、30g酪蛋白混合,
    用磷酸鹽緩沖液溶解并定容至1000ml,得到封閉液;其中,磷酸鹽緩沖液的濃度為
    0.02M,pH值為7.2;
    所述β-內酰胺類抗生素為如下中的至少一種:青霉素G、氨芐西林、阿莫西林、
    苯唑西林、鄰氯西林、新青霉素Ⅲ、雙氯西林、羧芐西林、甲氧西林、頭孢氨芐、頭
    孢唑啉、頭孢哌酮、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢噻吩、頭孢羥氨芐、頭孢噻呋、頭孢
    喹肟。
    2.根據權利要求1所述的受體試劑盒,其特征在于:所述酶標記的氨芐西林為
    HRP標記的氨芐西林;
    所述標準品溶液為青霉素G濃度如下的溶液:8.1μg/L、2.7μg/L、0.9μg/L、
    0.3μg/L、0.1μg/L。
    3.一種檢測β-內酰胺類抗生素的膠體金試紙,包括樣品吸收墊、膠體金墊、反
    應膜和吸水墊,其依次連接;所述膠體金墊包被有膠體金標記的帶有HIS標簽的SEQ?ID
    NO:1所示蛋白;所述反應膜上含有檢測帶和質控帶,檢測帶位置包被有阿莫西林與
    載體蛋白的偶聯物,質控帶位置包被有鼠抗HIS標簽單克隆抗體;
    所述β-內酰胺類抗生素為如下中的至少一種:青霉素G、氨芐西林、阿莫西林、
    苯唑西林、鄰氯西林、新青霉素Ⅲ、雙氯西林、羧芐西林、甲氧西林、頭孢氨芐、頭
    孢唑啉、頭孢哌酮、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢噻吩、頭孢羥氨芐、頭孢噻呋、頭孢
    喹肟。
    4.根據權利要求3所述的膠體金試紙,其特征在于:所述載體蛋白為OVA。
    5.一種檢測樣品中β-內酰胺類抗生素的方法,為如下Ⅰ或Ⅱ所示:
    Ⅰ、檢測樣品中β-內酰胺類抗生素的方法包括如下步驟:
    1)將待測樣品進行前處理,得到待測樣本溶液;
    2)用權利要求1或2所述受體試劑盒對所述待測樣本溶液進行檢測;
    所述待測樣品為牛奶:將牛奶用樣品稀釋液按1:4稀釋,4℃、10000rpm離心,
    取上清液,作為待測樣本溶液;
    所述待測樣品為奶粉:稱取1g奶粉,溶于5mL樣品稀釋液中,混合均勻,作為待
    測樣本溶液。
    所述待測樣品為尿液:將尿液直接作為待測樣本溶液;
    所述待測樣品為肌肉、魚、蝦或蛋:將待測樣品勻漿處理,得到均質樣品,將每
    5g均質樣品加入10mL乙腈水溶液中,上下顛倒震蕩10min,5000rpm離心10min,取
    上清,氮氣吹干,用1mL樣品稀釋液重懸,得到的溶液即為待測樣本溶液;乙腈水溶
    液中乙腈和水的體積比為9:1;
    所述待測樣品為蜂蜜:將每5g待測樣品加入15mL去離子水中,混合;將所述混
    合溶液用Oasis固相萃取柱進行純化,用甲醇洗脫,收集洗脫液,氮氣吹干,用1mL
    樣品稀釋液重懸,得到的溶液即為待測樣本溶液。
    Ⅱ、檢測樣品中β-內酰胺類抗生素的方法包括如下步驟:
    1)將待測樣品進行前處理,得到待測樣本溶液;
    2)用權利要求3或4所述所述膠體金試紙對所述待測樣本溶液進行檢測;
    所述樣品稀釋液為0.1mol/L、pH值為7.2的磷酸鹽緩沖液。
    6.SEQ?ID?NO:1所示蛋白在檢測β-內酰胺類抗生素中的應用;
    所述β-內酰胺類抗生素為如下中的至少一種:青霉素G、氨芐西林、阿莫西林、
    苯唑西林、鄰氯西林、新青霉素Ⅲ、雙氯西林、羧芐西林、甲氧西林、頭孢氨芐、頭
    孢唑啉、頭孢哌酮、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢噻吩、頭孢羥氨芐、頭孢噻呋、頭孢
    喹肟。
    展開

專利技術附圖

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